猿猴病毒40T抗原转化的人脐静脉内皮细胞系PUMC-HUVEC-T1的建立

发布时间：2017-09-04 11:28

  本文关键词：猿猴病毒40T抗原转化的人脐静脉内皮细胞系PUMC-HUVEC-T1的建立

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【摘要】：目的建立猿猴病毒40(SV40)T抗原转化的人脐静脉内皮细胞(HVUEC)模型,为内皮研究提供可利用资源。方法分离人脐静脉内皮细胞,原代培养。感染含有SV40大T、小T抗原的慢病毒,连续传代培养。对感染后的HUVEC,RT-PCR检测大T的表达,免疫细胞化学检测vWF、CD31、CD34的表达及结合凝集素能力,透射电镜观察内皮细胞的超微结构,Matrigel检测管状成型,进行染色体核型分析,皮下接种BABL/c-nu裸鼠检测致瘤性,PCR法进行种属鉴定及支原体检测,短串联重复序列(STR)检测鉴定细胞身份。结果转化后的人脐静脉内皮细胞命名为PUMC-HUVEC-T1,扁平多角状,汇合时典型铺路石排列,体外传代40代以上(1∶3～4);细胞中有SV40LT mRNA的表达;vWF、CD31、CD34表达均阳性,可结合荆豆凝集素-1(UEA-1);电镜可见WP小体;不同代数细胞核型正常稳定,裸鼠体内接种不成瘤。PUMC-HUVEC-T1种属鉴定为人源性,STR结果与原代HUVEC一致,无支原体的污染,国家实验细胞资源共享平台收藏。结论建立了易获得、背景清楚、质量可靠的SV40 T抗原转化的HUVEC细胞系PUMC-HUVEC-T1。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心;
【关键词】： 人脐静脉内皮 SV 反转录-聚合酶链反应 免疫组织化学 透射电镜
【基金】：国家实验细胞资源共享平台资助项目
【分类号】：R363
【正文快照】： 人脐静脉内皮(human umbilical vein endothelialcells,HUVEC)是研究内皮细胞生物学特性及内皮细胞相关疾病的理想模型,原代HUVEC来源受限,分离复杂,且体外培养代数有限。猿猴病毒40(SV40)的大T(SV40LT)抗原可有效诱导哺乳动物细胞绕过衰老期(M1期),继续体外传代[1～3]。本实

【参考文献】

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本文编号：791270