刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达

发布时间：2017-09-04 11:39

  本文关键词：刚地弓形虫肌动蛋白基因的克隆与表达

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【摘要】：目的克隆和表达刚地弓形虫肌动蛋白(TgACT)基因,并分析其免疫反应性。方法提取弓形虫RH株速殖子的总RNA。根据TgACT基因编码序列(登录号为XM_002369622.1)设计合成引物,进行逆转录PCR(RT-PCR)扩增,扩增产物经双酶切后连接入pET-30a(+)载体。将重组质粒pET30a-TgACT转化至大肠埃希菌(E.coli)DH5α,阳性菌落经PCR和双酶切鉴定,并测序。pET30a-TgACT在E.coli BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物经SDS-PAGE鉴定。分别用抗多聚组氨酸标签(Anti-His)抗体和兔抗弓形虫血清为一抗进行蛋白质印迹(Western blotting)分析。结果 RT-PCR扩增产物约为1 100 bp。菌落PCR、双酶切及测序结果显示,重组质粒pET30a-TgACT构建成功。SDS-PAGE结果表明,目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达,相对分子质量(M r)约为49 000。通过蛋白的变性和复性处理及纯化,获得可溶性纯化蛋白。Western blotting结果显示,重组TgACT蛋白能被Anti-His抗体和兔抗弓形虫血清识别。结论成功构建重组质粒pET30a-TgACT,获得刚地弓形虫重组肌动蛋白,且具有免疫反应性。
【作者单位】： 太原师范学院生物系;山西医科大学医学寄生虫学研究所;
【关键词】： 刚地弓形虫 肌动蛋白 基因克隆 原核表达 免疫反应性
【基金】：国家自然科学基金(No.81071374)~~
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种呈世界性分布的专性细胞内寄生原虫,可引起人兽共患的弓形虫病[1]。目前,对防治该病尚无理想的药物和可用的疫苗,疫苗预防是首选策略,寻求有效的保护性抗原至关重要[6]。弓形虫缺乏运动细胞器,以“滑行运动”的方式实现侵入宿主细胞的过程

【参考文献】

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本文编号：791336