用合成多肽为半抗原制备Bt Cry1Ab的单克隆抗体

发布时间：2017-09-05 22:39

  本文关键词：用合成多肽为半抗原制备Bt Cry1Ab的单克隆抗体

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【摘要】：由于Bt Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac晶体蛋白之间具有很高的同源性(82%~90%),采用常规的单抗制备方法很难制取特异性强的Bt Cry1Ab单抗,为了制备抗Bt Cry1Ab蛋白的特异性单克隆抗体(MAB),本研究从NCBI获得了Bt Cry1Ab蛋白的氨基酸序列,根据ANTHEPORT和DNAStar软件对其抗原性、亲水性和表位性分析结果选定BtCry1Ab特异性肽段进行人工合成,并将其偶联于匙孔血蓝蛋白(KLH)免疫动物,应用细胞融合技术制备了抗该肽段的杂交瘤细胞22株。通过ELISA试验从中筛选出与Bt Cry1Ab天然蛋白产生特异性反应的单克隆抗体杂交瘤细胞株一株(3A10)。经检测,其分泌的抗体亚类为IgG1型;轻链属κ型;杂交瘤细胞株染色体数目为89~108条;用其制作的腹水对Bt Cry1Ab合成肽的反应效价为1∶1×107;对Bt Cry1Ab天然蛋白的反应效价为1∶1×104;纯化后的抗体对Bt Cry1Ab合成肽的效价为1∶1×108;对Bt Cry1Ab天然蛋白的效价为1∶2×104。抗体的相对亲和力为0.5μg/mL,对Bt Cry1Ab蛋白的最低可检测值为10ng/mL。ELISA结果显示,3A10杂交瘤细胞株所分泌的MAB能特异性识别合成肽和Bt Cry1Ab蛋白,而对同源的Cry1Ac和Cry1Aa蛋白无交叉反应;本研究所制备的Bt Cry1Ab单克隆抗体能够对常规棉和抗虫棉(Gossypium hirsutumL.)进行有效的区分,并且能特异性的识别其中的Bt Cry1Ab蛋白。
【作者单位】： 中国农业科学院生物技术研究所;
【关键词】： Bt CryAb 单克隆抗体 合成肽
【基金】：国家转基因生物新品种培育重大专项(No.2009ZX08012-017B) 中国农业科学院生物技术研究所基本科研业务费专项资金(NO.2011-13)
【分类号】：R392
【正文快照】： 存在于土壤中的苏云金芽孢杆菌(Bacilusthuringiensis,简称Bt)是一种革兰氏阳性细菌,在形成芽孢的过程中,能产生出杀虫晶体蛋白(喻子牛,1990)。Bt的杀虫晶体蛋白对磷翅目昆虫有特异杀虫性。由于Bt Cry1Aa、Cry1Ab和Cry1Ac三种蛋白具有高达82%~90%的同源性,因此,Bt Cry1Aa、Cry

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本文编号：800636