Ⅲ型登革病毒D9964株在人胚肺二倍体细胞KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究

发布时间：2017-09-07 23:14

  本文关键词：Ⅲ型登革病毒D9964株在人胚肺二倍体细胞KMB17上适应株选育纯化及其增殖动力学研究

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【摘要】：选育出Ⅲ型登革病毒中国株在人胚肺二倍体细胞KMB17上的适应株并对其生物学特性和增殖动力学进行研究,为研究登革病毒减毒活疫苗奠定基础。Ⅲ型登革病毒中国株D9964经RT-PCR鉴定型别正确后,进行毒种扩增和滴度测定;以4.0MOI接种KMB17细胞,反复传代直至病毒能在细胞中适应和增殖;连续传10代,选育出KMB17细胞适应株,经三轮噬斑纯化筛选适应株,微量滴定法检测10代病毒培养液的感染性滴度;免疫荧光法检测纯化病毒株的抗原性;将病毒纯化株接种KMB17细胞,取第3～7d细胞提取RNA,以Real-time PCR检测病毒适应株在细胞中的增殖动态。结果显示,经适应性培养后Ⅲ型登革病毒中国株D9964能在KMB17细胞中稳定增殖,经噬斑纯化获得了高纯度的细胞适应株,病毒保持了原始毒株良好的抗原性;增殖动力学研究显示第5～6d为病毒在细胞内的增殖高峰期。
【作者单位】： 中国医学科学院/北京协和医学院
【关键词】： 登革病毒 人胚肺二倍体细胞 适应性 增殖动力学
【基金】：云南省科技厅社会发展科技计划项目(2011CA016) 云南省自然科学基金项目(2012FB188,2009ZC187M) 中国医学科学院病原生物学研究所中央级公益性科研院所科研业务费项目(2009IPB102) 中国医学科学院医学生物学研究所引进人才项目(IMB2009RC01)
【分类号】：R373.9
【正文快照】： 登革病毒(Dngue virus,DEN)属于黄病毒科黄病毒属中的一个血清型亚群,主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊等媒介昆虫传播,引起登革热(Dengue fe-ver,DF)以及发病率和死亡率很高的登革出血热(Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS)[1]。病毒在蚊

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