猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选

发布时间：2017-09-12 09:24

  本文关键词：猪Toll样受体7基因人工miRNA表达质粒的构建与筛选

  更多相关文章： Toll样受体基因 人工miRNA RNA干扰 筛选

【摘要】：目的构建猪Toll样受体7(TLR7)基因的人工miRNA(amiRNA)特异性表达载体,筛选有效amiRNA。方法 RT-PCR扩增猪TLR7基因的1984～2648 bp序列,构建融合表达载体pTLR7-EGFP。设计针对猪TLR7的5对amiRNA,构建重组干扰质粒pcDNA5-miRTLR7。将pcDNA5-miRTLR7和pTLR7-EGFP共转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR检测amiTLR7的表达,以荧光显微镜观察和流式细胞术分析干扰效率。结果 5个amiTLR7都成功表达,且均能沉默NIH-3T3细胞中TLR7基因的表达,抑制效率为36.99%到97.28%,其中amiTLR7-3效果最佳。结论成功构建了针对猪TLR7基因的amiRNA表达质粒,筛选出了沉默猪TLR7基因的最佳干扰序列。
【作者单位】： 扬州大学兽医学院 禽类预防医学省部共建教育部重点实验室;
【关键词】： Toll样受体基因 人工miRNA RNA干扰 筛选
【基金】：国家自然科学基金(31001052) 教育部创新团队基金(IRT0978) 江苏省优势学科建设工程资助项目(2010年)
【分类号】：R346
【正文快照】： Toll样受体家族(Toll-like receptors,TLRs)是近年来发现的一类信号转导跨膜受体,可识别病原相关分子模式,引发一系列信号转导通路,导致炎症介质的释放,在天然免疫防御中起重要作用。迄今为止,在人类有11种、小鼠有12种、猪有10种TLRs分子已经被鉴定确实[1-2]。其中TLR7可识

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李劲涛;杨军;张秀丽;谭兴;;RNAi最新研究概况[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年11期

2 段凤云;房永祥;陈国华;王生富;何延华;景志忠;;猪Toll样受体7基因的克隆及序列分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2010年06期

3 杨林立;李瑞梅;潘新华;钱e，

本文编号：836388