人精子肌动蛋白样蛋白7a蛋白在大肠杆菌系统的表达纯化及多克隆抗体制备

发布时间：2017-09-13 07:02

  本文关键词：人精子肌动蛋白样蛋白7a蛋白在大肠杆菌系统的表达纯化及多克隆抗体制备

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【摘要】：目的在大肠杆菌系统表达并纯化人精子肌动蛋白样蛋白7a(ACTL7a)的N段(1-70),制备兔抗ACTL7a多克隆抗体。方法构建重组表达质粒pGEX-6p-1-ACTL7a(1-70),以重组质粒转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性重组菌,IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍离子金属螯合树脂和谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B树脂两次亲和纯化和分子筛分离目的蛋白;以表达的ACTL7a(1-70)蛋白免疫新西兰大白兔,制备抗ACTL7a的多克隆抗体。ELISA检测抗体效价,Western blot法鉴定抗体特异性,免疫荧光组织化学技术检测ACTL7a在曲精小管细胞的表达。结果经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达出目的蛋白ACTL7a(1-70),纯化后免疫新西兰大白兔,成功获得抗血清。血清效价达到1:160000以上,且具有良好的特异性。结论成功构建了ACTL7a基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达,经纯化获得高纯度的目的蛋白;制备出兔抗ACTL7a抗体,效价及特异性均良好。
【作者单位】： 中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 医学分子生物学国家重点实验室 生物化学与分子生物学系;
【关键词】： ACTLa 原核表达 多克隆抗体
【基金】：国家科技支撑计划(2012BAI31B08) 国家重点实验室专项基金(2060204)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 精子发生是生物体内非常复杂的过程之一。小鼠中大约4%的基因组是特异表达在生殖细胞中,其中大多数是在减数分裂后具有活性[1]。通过cDNA芯片技术发现有101个基因可能涉及到调节精子发生过程[2]。1 652个基因在减数分裂开始时的转录丰度明显增加,351(20%)个基因只在雄性生殖

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 付俊;缪时英;;小鼠睾丸曲细精管生精上皮的分离及形态观察[J];中国医学科学院学报;2011年06期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴晓e，

本文编号：842197