应用含内参的多重实时荧光RT-PCR方法快速检测登革病毒和基孔肯雅病毒

发布时间：2017-09-14 13:44

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【摘要】：目的建立一种登革病毒、基孔肯雅病毒并含人类基因内参检测的多重实时荧光RT-PCR方法,能在同一反应管内同时检测目前发现的所有来源的登革病毒或基孔肯雅病毒。方法针对登革病毒3′端非编码区和基孔肯雅病毒结构蛋白E2-6K-E1区以及人体各类组织细胞中均能稳定表达的RNAse P基因,设计了3套特异性引物和探针,建立了1套能同时检测登革病毒、基孔肯雅病毒及含有人类基因检测内参的多重实时荧光RT-PCR方法,对其灵敏性和特异性进行了验证,并对临床发热病人标本进行了应用评估。结果该方法对检测体外转录合成的登革病毒和基孔肯雅病毒RNA的灵敏性可达最低每个反应10～100拷贝,对检测登革1型病毒和基孔肯雅病毒的灵敏性分别可达最低每个反应0.1TCID50/mL和1TCID50/mL。用20株登革病毒、4株基孔肯雅病毒和日本脑炎病毒、西尼罗病毒、黄热病毒、盖塔病毒、辛德毕斯病毒各1株进行检测,方法的特异性均为100%。方法应用于189份发热病人血清标本检测,可准确地鉴定出其中登革病毒或基孔肯雅病毒核酸阳性的标本,且所有血清标本均能被内参引物和探针有效地扩增和杂交。结论本研究建立了一种高灵敏性、高特异性且含人类基因内参检测的登革病毒和基孔肯雅病毒多重实时荧光RT-PCR检测方法,可作为登革热或基孔肯雅热病人早期快速鉴别诊断的有效工具,也可用于蚊媒携带登革病毒或基孔肯雅病毒的高通量快速筛查。
【作者单位】： 广东检验检疫技术中心;广东省疾病预防控制中心;
【关键词】： 登革病毒 基孔肯雅病毒 内参 多重实时荧光RT-PCR
【基金】：质检公益性行业科研专项基金资助项目(No.201010036)~~
【分类号】：R373.3
【正文快照】： 登革病毒(dengue virus,DENV)属黄病毒科黄病毒属成员,有四种血清型,可通过蚊类叮咬人而传播,四种血清型登革病毒均可引起登革热、登革出血热甚至登革休克综合征等不同危害程度的疾病。基孔肯雅病毒(chikungunya virus,CHIKV)属于披膜病毒科甲病毒属,可引起人类发生与登革热

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本文编号：850361