丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响

发布时间：2017-09-20 11:13

  本文关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响

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【摘要】：目的探讨核心蛋白与Dicer的相互作用及其对Dicer功能的影响。方法构建丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达质粒,采用免疫荧光染色和Western blot检测核心蛋白的表达,Western blot检测核心蛋白对细胞内Dicer表达的影响,免疫共沉淀技术检测真核细胞内核心蛋白与Dicer的相互作用。体外转录合成dsRNA,检测核心蛋白对Dicer切割dsRNA作用的影响。结果在细胞内,核心蛋白能够明显恢复被shRNA抑制的虫荧光素酶基因的表达(P0.05),而对siRNA引发的RNAi无拮抗作用。在真核细胞内,加入核心蛋白后,Dicer的表达量无明显改变,并能检测到两者相互结合。在体外抑制实验中,重组表达的Dicer能切割dsRNA产生siRNA;核心蛋白加入后,dsRNA的切割受到抑制。结论核心蛋白在真核细胞内可以结合Dicer,并通过抑制Dicer对dsRNA的切割作用,抑制RNA干扰作用。
【作者单位】： 重庆医科大学附属第二医院检验科;
【关键词】： 丙型肝炎病毒 核心蛋白 Dicer酶 免疫共沉淀
【基金】：国家自然科学基金(30972582,30500428)~~
【分类号】：R373.21
【正文快照】： RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一种由双链RNA介导的、转录后mRNA水平关闭相应基因表达的序列特异性基因沉默机制,在人类抵抗RNA病毒的过程中有重要作用[1]。Dicer是RNAi形成过程中所必需的一种核酸内切酶。它通过切割双链RNA或者发夹状RNA(shRNA)来产生小干扰RNA(small in

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本文编号：887709