小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2017-09-20 16:11

  本文关键词：小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

  更多相关文章： 腺病毒载体 CD 免疫调节

【摘要】：目的:构建携带小鼠CD200基因的重组腺病毒载体,并鉴定其在小鼠胰腺内皮细胞(mile sven 1,MS1)中mCD200基因的表达情况。方法:mCD200基因亚克隆至腺病毒穿梭质粒pYr-adshuttle-4,获得重组质粒pYr-ads-4-mCD200。从该重组质粒上利用LR(attL×attR)特异性同源重组的方法,将mCD200表达框构建至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST上,获得的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切,转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒rAd-4-mCD200,并用酶切和PCR等鉴定。采用TCID 50(tissue cell infectious dosage 50,TCID50)法测定重组腺病毒滴度。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增,并感染小鼠内皮细胞MS1,通过荧光显微镜、real-time PCR检测MS1中小鼠CD200基因的表达。结果:PCR鉴定重组腺病毒证实重组腺病毒rAd-4-mCD200构建成功;扩增后检测病毒滴度约为109~1010pfu/ml;荧光显微镜及real-time PCR检测发现该重组腺病毒能在MS1细胞中高效的表达。结论:构建的重组腺病毒rAd-4-mCD200在MS1细胞中成功表达mCD200基因,为下一步开展关于CD200基因免疫抑制调节等相关研究奠定了基础。
【作者单位】： 宁夏医科大学检验学院;宁夏医科大学总医院宁夏人类干细胞研究所;
【关键词】： 腺病毒载体 CD 免疫调节
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:30960176) 宁夏自然科学基金资助项目(编号:NZ11262)
【分类号】：R346
【正文快照】： CD200也称OX-2、MRCOX2、MOX2,属于白细胞分化抗原,由McMaster和Williams[1]于1979年发现,与其受体CD200R均属于免疫球蛋白超家族,广泛表达于胸腺细胞、B细胞、活化的T细胞、血管内皮细胞、滤泡状树突细胞及外周神经元[2-4]。CD200的受体(CD200R)表达在髓样细胞上,是一种细胞

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈静韵,丁焕文,王捷,杨汝德;用于骨移植的hCbfa1重组腺病毒载体的构建[J];华南理工大学学报(自然科学版);2005年08期

2 郭寿贵,吴平生,王月刚;人低氧诱导因子1α腺病毒载体的构建及鉴定[J];中国现代医学杂志;2005年17期

3 崔正军;岑瑛;张洁;;高滴度腺病毒介导的绿色荧光蛋白和反义血管内皮生长因子165cDNA的制备[J];郑州大学学报(医学版);2006年01期

4 叶震敏;张颂文;缪竞诚;盛伟华;王伟录;吴晓阳;杨吉成;;人白介素24腺病毒载体的构建与鉴定[J];苏州大学学报(医学版);2006年01期

5 胡运生;范清宇;马保安;裘秀春;潘勇;;hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞的表达及生物学效应的观察[J];中国美容医学;2006年03期

6 陈小华;马军;唐芙爱;李印;卜玉洁;温洪涛;段芳龄;;hIFN-β基因重组腺病毒载体的构建[J];胃肠病学和肝病学杂志;2006年02期

7 吕金星;严春寅;侯建全;浦金贤;平季根;温端改;;人血红素氧合酶-1重组腺病毒的构建与鉴定[J];江苏医药;2006年11期

8 刘铭;张晓莉;夏梅;张雪;张明霞;;腺病毒载体介导的bFGF基因体外转染大鼠平滑肌细胞的实验研究[J];重庆医学;2006年22期

9 姜友昭;张玲;周艳;陈兵;;小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达[J];第三军医大学学报;2007年01期

10 华平;陈炬;张惠忠;杨淞然;杨艳旗;熊利华;张华;;腺病毒介导血管内皮细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞[J];中山大学学报(医学科学版);2007年01期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 刘金娟;马翔;;小鼠HSP27基因腺病毒表达载体的构建与鉴定[A];第四届长三角妇产科学术论坛暨浙江省2009年妇产科学术年会论文汇编[C];2009年

2 刘潇聪;陈耀凯;;腺病毒体外介导CTLA4-Ig在L02细胞中的表达及其生物学活性[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年

3 张春燕;李方和;龚劲松;陈妍;;抗腺病毒载体单克隆抗体的制备及其初步鉴定[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年

4 王桂兰;鲁继荣;成焕吉;马青山;张云峰;;高滴度含有目的基因IL-4RA的逆转录病毒的包装和浓缩[A];中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编[C];2006年

5 张子阳;袁春玉;杨亦彬;;人促血管生成素1腺病毒载体的构建[A];贵州省医学会肾脏病学分会2008年学术年会论文汇编[C];2008年

6 赵平;马道新;纪春岩;;HLA特异的HCMV多表位Ad5F35腺病毒载体核酸疫苗的制备[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

7 傅跃先;张强;康权;甘立强;罗庆;刘燕;;腺病毒介导骨形态蛋白-9基因转染脂肪干细胞的实验研究[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

8 樊彩斌;温端改;欧阳骏;侯建全;严春寅;浦金贤;李纲;农绍军;;编码IKK2dn重组腺病毒载体的构建及表达验证[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年

9 张金康;孟国林;刘建;胡蕴玉;毕龙;袁志;段春光;李丹;刘民;白峰;黄鑫;禚文昆;马煜;;腺病毒介导入VEGF165和ANG-1双基因转染大鼠BMSCs及对其增殖的影响[A];第十九届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2010年

10 鲁茁壮;倪芳;胡泽斌;王立生;吴祖泽;;5型腺病毒载体纤维顶球改造及对血液细胞的感染效率研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前9条

1 记者 李天舒　通讯员 朱丹萍;一研究证实腺病毒载体依然是安全的[N];健康报;2011年

2 记者 唐先武　特约记者 肖鑫;一种新型泛素化酶可有效清除病毒感染[N];科技日报;2009年

3 加闻;加拿大非典疫苗研究获新进展[N];医药经济报;2003年

4 郭莲舫;心理障碍可致感染性疾病[N];卫生与生活报;2007年

5 白毅;β—arrestin1蛋白核内新功能被发现[N];中国医药报;2008年

6 王博;抗体工程的新纪元[N];北京科技报;2010年

7 王俊鸣;接种疫苗的猴子产生免疫反应[N];科技日报;2003年

8 刘霞;“猴子版本”艾滋病疫苗研制取得新进展[N];科技日报;2011年

9 常丽君;科学家发现免疫系统中的“维和部队”[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 周莲娣;香菇多糖对约氏疟原虫感染BALB/c小鼠红内期免疫应答调节的实验研究[D];中国医科大学;2008年

2 边莉;HGF基因修饰的MSC生物学特性及免疫调控作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年

3 吴成君;Ad35腺病毒载体构建及病毒蛋白免疫原性研究[D];北京协和医学院;2009年

4 于彬;六邻体嵌合型重组5型腺病毒载体逃避预存免疫的研究[D];吉林大学;2012年

5 孙昭;间充质干细胞免疫调节功能及其机制的研究[D];中国协和医科大学;2007年

6 席启林;维生素D受体调控尿钙重吸收的分子机制研究[D];华中科技大学;2010年

7 徐尤年;血管生成素1腺病毒载体的构建及其对内毒素性肺损伤炎症消退的影响[D];华中科技大学;2010年

8 郭振红;凋亡信号和免疫微环境对树突状细胞的免疫调控作用[D];第二军医大学;2005年

9 陈月;甘露聚糖结合凝集素对抗原提呈细胞分化与功能的调节作用[D];第一军医大学;2005年

10 史丽云;小鼠树突状细胞表面新型免疫抑制性受体DIgR2的功能研究[D];浙江大学;2006年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 魏菁;腺病毒介导ChM-I基因抑制BMSCs体内构建的软骨血管化的实验研究[D];西北大学;2010年

2 宋付凯;高表达hRAMP1基因腺病毒载体的构建及其在兔MSCs中表达的实验研究[D];遵义医学院;2010年

3 苏秀云;应用AdEasy腺病毒载体系统构建携带人骨形成蛋白2基因的重组腺病毒[D];第一军医大学;2005年

4 孙坚萍;EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒载体的构建和表达[D];青岛大学;2005年

5 李斐;腺病毒介导的CNTF基因在大鼠脊髓表达的实验研究[D];河北医科大学;2011年

6 陈真;催乳素/催乳素受体途径介导的免疫调节作用研究[D];福建医科大学;2002年

7 濮海平;免疫调节细胞因子白介素-10基因克隆化及原核重组白介素-10蛋白的制备[D];青岛大学;2004年

8 倪芳;血液细胞靶向性腺病毒载体的构建及功能检测[D];安徽医科大学;2006年

9 王潇潇;呼吸道合胞病毒F蛋白编码基因重组腺病毒载体的构建及表达[D];北京生物制品研究所;2006年

10 孙安娜;肿瘤微环境诱导不成熟树突状细胞为调节性树突状细胞的研究[D];浙江大学;2007年

，

本文编号：889069