抗组氨酸标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用

发布时间：2017-09-25 21:10

  本文关键词：抗组氨酸标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用

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【摘要】：目的制备特异性抗组氨酸标签(His-tag)的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以合成的15个组氨酸的多肽耦联牛血清清蛋白(BSA)为抗原免疫Balb/c小鼠,按常规方法进行细胞融合。采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选阳性克隆及有限稀释法进行克隆化,用Protein G柱亲和纯化抗体及ELISA检测纯化抗体的效价、相对亲和力及抗体亚类,用ELISA及Western blotting对mAb的特异性进行鉴定,并与含His-tag的重组蛋白特异性抗体配对建立双抗夹心ELISA定量检测对应的重组蛋白。结果筛选出5株能稳定分泌抗His-tag的杂交瘤细胞株,抗体亚类均为IgG1(κ),其中1-G2亲和力最高(1.27×1010),并且1-G2在ELISA及Western blotting中能与不同类型的含His-tag的重组蛋白结合,能与降钙素原(PCT)抗体构建双抗夹心ELISA定量检测含His-tag的PCT重组蛋白,灵敏度达到4.6ng/mL。结论成功制备了特异性好、亲和力高、能稳定分泌抗His-tag的mAb,该抗体能应用于ELISA及Western blotting等多种His-tag的检测方法,为蛋白质研究检测、定位、相互作用等提供了工具。
【作者单位】： 解放军第八二医院一四九临床部;
【关键词】： 抗体 单克隆 酶联免疫吸附测定 印迹法 蛋白质 组氨酸标签
【基金】：全军医药卫生科研资助项目(11MA048)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 抗组氨酸标签(histidine-tag,His-tag)是由6个或6个以上组氨酸组成的短肽,其主要用途是用于表达分子构建融合蛋白的快速分离及纯化,与其他标签相比具有相对分子质量小、免疫原性弱,不影响目的分子空间构型等优势。利用His-tag亲和镍离子螯合物的特性,采用固定化金属离子亲和

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本文编号：919581