空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析

发布时间：2017-09-28 08:42

  本文关键词：空肠弯曲菌cj0069蛋白的克隆表达及抗原性分析

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【摘要】：目的构建空肠弯曲菌cj0069基因原核表达系统,克隆表达cj0069蛋白,根据cj0069的氨基酸序列进行抗原性结构预测分析,并验证其抗原性特征。方法利用在线软件对cj0069蛋白进行抗原性结构预测分析;用PCR方法从中国分离菌株ICDCCJ07001的基因组DNA中扩增cj0069基因,连接入pMD18-T载体,将重组质粒pMD18-T/cj0069和表达载体pGEX-4T-1双酶切,回收cj0069和pGEX-4T-1酶切产物后连接,连接产物转化入大肠埃希菌E.coli BL21(DE3),对重组质粒pGEX-4T-1/cj0069进行测序及酶切鉴定,IPTG诱导其表达,表达产物进行SDS-PAGE分析及飞行质谱鉴定;利用空肠弯曲菌兔免疫血清,采用Western blot分析cj0069蛋白的抗原反应性。结果 PCR扩增、DNA测序及酶切鉴定证实重组质粒pGEX-4T-1/cj0069构建成功,重组表达蛋白rGST-cj0069经飞行质谱鉴定为保守空肠弯曲菌蛋白。结构预测获得cj0069蛋白的抗原性肽段及线性表位等抗原性结构特征。Western blot检测显示该蛋白不能被空肠弯曲菌免疫兔血清识别。结论成功构建cj0069基因重组表达载体pGEX-4T-1/cj0069,并在大肠埃希菌中高效表达,获得的空肠弯曲菌cj0069蛋白具有抗原性结构特征,但针对免疫血清不具有抗原反应性。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室;
【关键词】： 空肠弯曲菌 克隆 表达 cj 抗原性
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81071314)
【分类号】：R378
【正文快照】： 空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)为革兰染色阴性,微需氧,螺旋状弯曲杆菌。空肠弯曲菌感染是导致人类胃肠炎的主要病原菌之一[1,2]。空肠弯曲菌所致疾病的临床表现因人而异,如水样便、血便等[3]。此外,空肠弯曲菌感染可导致多种并发症,如菌血症、脑膜炎等,其中格林巴利综合征

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 周益装;张茂俊;肖迪;孟凡亮;张建中;;空肠弯曲菌CadF蛋白的原核表达与产物分析[J];中国病原生物学杂志;2010年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 童伟;张战军;贾天军;;肺炎衣原体Cpn0147基因的克隆、表达与定位及其重组蛋白的生物信息学分析[J];中国病原生物学杂志;2009年08期

2 郑丽舒;李武平;王刚;段招军;侯云德;;重组李斯特菌细胞溶解素LLO蛋白表达纯化及溶血活性鉴定[J];中国生物制品学杂志;2006年03期

3 刘敬,龚炜;HCV核心抗原基因的克隆和表达[J];生物学杂志;1999年01期

4 牛亚梅,王e，

本文编号：934891