优化重组人C-反应蛋白在酵母中的分泌表达

发布时间：2017-09-28 11:33

  本文关键词：优化重组人C-反应蛋白在酵母中的分泌表达

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【摘要】：目的:通过优化引导蛋白分泌的信号肽(signal peptide,SP),构建高效分泌表达具有免疫活性的重组人C-反应蛋白(recombinant human C-reactive protein,rhCRP)的毕赤酵母菌株。方法:通过重叠PCR和DNA重组技术,分别将信号肽MFαSP、CRN SP、SUC2 SP和MFα-op SP的基因重组到rhCRP基因的5′端后克隆到毕赤酵母表达载体上,获得的4种重组质粒分别重组到毕赤酵母菌X-33中进行甲醇诱导分泌表达,Western blot法鉴定蛋白分泌情况;利用HisTrap HP柱纯化rhCRP后用间接ELISA法鉴定其免疫反应性。结果:成功构建了4种重组质粒。4种SP能引导表达出大小约为23 kD的rhCRP,其中MFαSP引导rhCRP分泌的量约为另外3种信号肽的3~12倍。间接ELISA检测表明,纯化的rhCRP具有特异的免疫反应性。结论:成功筛选出了高效分泌表达rhCRP的重组毕赤酵母菌株并表达、纯化得到具有免疫反应性的rhCRP,为rhCRP相关的进一步临床及基础研究奠定了基础。
【作者单位】： 大连大学医学院;
【关键词】： C-反应蛋白 毕赤酵母 信号肽 分泌表达
【基金】：国家自然科学基金项目(编号:31070822) 辽宁省教育厅高校科研计划项目(编号:L2010015)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是1930年由美国的Tillett和Francis博士首先发现的能与肺炎球菌的C多糖发生沉淀反应的一种急性时相蛋白[1]。正常人群的CRP浓度很低,但在感染等病理过程中,血浆CRP浓度变化显著而迅速[1]。CRP的检测对许多炎症疾病的诊治及心血管疾病发病

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