植原体免疫主导膜蛋白A的原核表达载体构建、表达及其抗血清制备

发布时间：2017-09-29 19:19

  本文关键词：植原体免疫主导膜蛋白A的原核表达载体构建、表达及其抗血清制备

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【摘要】：目的构建植原体免疫主导膜蛋白A(IdpA)的原核表达载体,表达并纯化目的蛋白,制备抗血清。方法以重组克隆质粒pMD18-T-IdpA为模板PCR扩增IdpA基因片段,经酶切连接将IdpA基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),重组质粒转化感受态E.coli BL21(DE3),PCR和双酶切进行鉴定。IPTG诱导重组菌表达IdpA蛋白,并进行纯化和鉴定,以纯化获得的IdpA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并采用ELISA和Western blot法检测抗血清的效价和特异性。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-IdpA,并在大肠杆菌中能稳定表达IdpA蛋白,经纯化获得了纯度大于90%的高纯度目的蛋白,用纯化的IdpA蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了效价高于1∶320 000的强特异性抗IdpA蛋白抗血清。结论成功进行了IdpA的原核表达并制备了抗血清。
【作者单位】： 安徽农业大学生命科学学院;深圳职业技术学院;深圳市兰科植物保护研究中心;深圳市出入境检验检疫局;
【关键词】： 植原体 免疫主导膜蛋白 原核表达 重组蛋白IdpA 抗血清
【基金】：深圳市科技计划项目(JC200903180710A,JSA200903170245A)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 1967年,日本科学家土居养二等首次在桑树萎缩病中发现植原体(phytoplasma),植原体是一类GC含量比较低,无细胞壁,仅有3层单位膜包被的原核微生物,专性寄生于植物和昆虫,迄今在离体的无细胞培养基上尚未培养成功[1]。植物染病主要症状包括丛枝、黄化、花变叶、花器退化等,由于

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本文编号：943766