CXCR4基因shRNA表达质粒的构建及筛选鉴定

发布时间：2017-09-30 22:34

  本文关键词：CXCR4基因shRNA表达质粒的构建及筛选鉴定

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【摘要】：目的构建编码CXCR4 mRNA的短发卡样RNA(shRNA)表达质粒用以筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体。方法根据GenBank中登录的CXCR4基因的核苷酸序列,应用shRNA设计软件设计并合成4条短发卡shRNA的oligo DNA,构建shRNA重组质粒。采用酶切电泳和测序方法进行鉴定。将鉴定后的CXCR4基因shRNA重组质粒经脂质体介导转染胶质瘤U251细胞,24 h后经RT-PCR筛选有效的shRNA重组质粒。结果构建的质粒表达载体PCR鉴定均可扩增出目的条带,DNA测序结果与理论序列完全一致。RT-PCR检测显示,转染pGPU6/GFP/Rac1-421的U251细胞CXCR4基因mRNA的转录水平下降。结论成功构建CXCR4基因shRNA表达质粒,并筛选出效果最为明显的shRNA质粒表达载体为pGPU6/GFP/Rac1-421。
【作者单位】： 白城中心医院;吉林大学第二医院;吉林省申邦细胞工程研究所;
【关键词】： CXC趋化因子受体 RNA干扰 U细胞
【基金】：吉林省自然科学基金(No.201015175)
【分类号】：R346
【正文快照】： 胶质瘤是常见的中枢神经系统肿瘤,由于其发病机制不明确,目前主要以手术治疗为主,辅以放疗、化疗和免疫治疗,虽然取得了一定的临床效果,但并未从根本上提高胶质瘤患者的总体预后。趋化因子受体4(CXCR4),作为基质细胞衍生因子(SDF-1)的唯一配体,在卵巢、胃、甲状腺、乳腺、肺、

【参考文献】

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1 刘辉;周伟平;傅思源;吴孟超;;趋化因子受体CXCR4在肝细胞癌中的表达[J];第二军医大学学报;2008年11期

2 邱明远;李健文;郑民华;;CXCR4和CXCR7在肿瘤中的研究进展[J];中国癌症杂志;2010年03期

【共引文献】

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1 殷操;黄荣彩;纪焕中;卢志远;谢思明;管妍;沈丽佳;;口腔癌及癌前病变中PTEN与CXCR4的蛋白表达及相关性研究[J];广东牙病防治;2015年02期

2 谭卫国;冯鸣;吴庭枫;孙春明;邵忠;王中;周幽心;杜子威;;CXCR4/CXCL12在原发中枢神经系统淋巴瘤中的表达及其意义[J];临床神经外科杂志;2011年06期

3 刘莹;陈璇;黄光荣;;CXCL12/CXCR4生物轴在卵巢癌中作用研究进展[J];中华实用诊断与治疗杂志;2013年11期

4 郭清;吴小华;杨波;吕英璞;徐峰;张少静;;CXCL12-CXCR4生物轴与卵巢癌关系的动物实验研究[J];河北医药;2014年02期

5 陈强;李文贤;林晓杰;孙立江;隋爱华;;MMP-2和CXCR4mRNA在人肾透明细胞癌中的表达及意义[J];现代泌尿外科杂志;2014年02期

6 毛玲;薛天阳;许伟;;苦参碱对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞趋化因子受体4表达的影响[J];临床儿科杂志;2014年05期

7 郑大勇;董少婷;陈锦章;吕成伟;黄振华;黄娜;石敏;;鼻咽癌组织中CCR7和CXCR4的表达及其临床意义[J];海南医学;2014年11期

8 刘见荣;可飞;侯风刚;;结构性趋化因子及其受体与肿瘤[J];免疫学杂志;2015年02期

9 郭清;吴小华;镡丽霞;杨波;吕英璞;徐峰;张少静;;CXCL12-CXCR4生物轴与卵巢癌关系的动物实验研究[J];河北医药;2015年06期

10 郑慧哲;黄康;范宏芳;岳慧轩;华长星;曹永;于建渤;;胃肠癌相关的趋化因子及其受体[J];牡丹江医学院学报;2015年02期

中国博士学位论文全文数据库 前6条

1 吴包金;CXCR4基因沉默对黑色素瘤侵袭和转移影响的实验研究[D];第二军医大学;2009年

2 邱慧玲;肿瘤干细胞促卵巢癌淋巴管生成及转移的作用及机制研究[D];第三军医大学;2013年

3 缪叶;粘液表皮样癌耐药机制的研究[D];第四军医大学;2013年

4 张华;南蛇藤提取物抑制肝癌淋巴管生成的作用及机制研究[D];扬州大学;2013年

5 缪叶;粘液表皮样癌耐药机制的研究[D];第四军医大学;2013年

6 张磊;黑胸大蠊浓核病毒衣壳蛋白的表达与定位研究[D];武汉大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 卢万里;CXCR-4和MMP-2在非小细胞肺癌中的表达及其意义[D];郑州大学;2010年

2 胡守森;趋化因子CXCL12及受体CXCR4在喉鳞癌中的表达及意义[D];郑州大学;2010年

3 孙凯;CXCL12和CXCR4在早期胃癌和进展期胃癌中的表达[D];兰州大学;2011年

4 盛文;CXCR4基因沉默对宫颈癌细胞体外侵袭转移能力的影响[D];中南大学;2012年

5 王爱萍;白介素8（IL8）及亚型与卵巢上皮性癌相关性研究[D];广西医科大学;2013年

6 陈昌贤;卵巢上皮癌多药耐药分子机制生物信息学研究[D];广西医科大学;2013年

7 张茂泉;CCR4和CCR7在乳腺癌不同分子亚型中的表达及意义[D];福建医科大学;2013年

8 宋占利;涎腺腺样囊性癌细胞ACC-3细胞株ALDH1~+细胞的生物学功能的研究与探讨[D];河北北方学院;2013年

9 王芳;CXCR4及其下游因子在宫颈鳞癌中的表达及意义[D];中南大学;2013年

10 韩明;果蝇先天性免疫Toll与Imd信号通路相关基因进化机制研究[D];南京师范大学;2014年

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1 亓同钢,汪运山,王 芳,吴文秀,关广聚;AFP基因SiRNA表达质粒的构建及鉴定[J];山东大学学报(医学版);2004年03期

2 王海东;蒋耀光;杨康;林一丹;王如文;邓波;;Fas基因siRNA表达质粒的构建及鉴定[J];重庆医学;2008年04期

3 王志华;田长富;刘理;谭玉英;许秀兰;;表达质粒pdBHhIL-4转化小鼠C_(127)细胞的实验研究[J];哈尔滨医科大学学报;1993年04期

4 张美红;周克元;;靶向人Bax inhibitor-1的siRNA表达质粒的构建及鉴定[J];郑州大学学报(医学版);2008年02期

5 孙绍娟;王鸿程;许学亮;孔志斌;简丽萍;曹兵;;携带STAT3基因的siRNA表达质粒的构建与鉴定[J];泸州医学院学报;2007年01期

6 贺欢;梁伟波;张林;;CVB3-VP1基因与IL-15双表达质粒的构建[J];四川医学;2010年07期

7 麻莉 ,刘友生,王晓东,葛晓冬,李永旺;内毒素结合肽表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[J];解放军医学杂志;2003年04期

8 李健,郑德先,刘彦信;FasL N-端编码序列对其表达的影响[J];基础医学与临床;2005年07期

9 袁时芳;师长宏;晏伟;李南林;吕勇刚;王廷;王岭;张英起;;人多形上皮黏蛋白与巨噬细胞集落刺激因子基因融合构建双基因多表位抗原的真核共表达质粒(英文)[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年42期

10 曲乐丰,景在平;血管内皮生长因子和Fas配体共表达质粒的构建及其在细胞中的表达[J];中华实验外科杂志;2003年10期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 郑芳;夏勇;周新;胡汉宁;姜新强;;人C反应蛋白的克隆、表达和纯化[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

2 姚德生;李力;Kenneth Garson;Barbara C．Vanderhyden;;OPCML基因的克隆[A];中华医学会第九次全国妇科肿瘤学术会议论文汇编[C];2006年

3 辛永宁;姜曼;林中华;张丁丁;耿宁;宣世英;;PNPLA3 I148M肝脏特异表达质粒构建[A];中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2013年

4 汪玲;胡国龄;谭德明;刘双虎;;TGF-β_1Ⅱ型受体部分基因表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响[A];中华医学会第七次全国感染病学术会议论文汇编[C];2001年

5 庄学伟;邹雄;张义;王洪春;杨晓静;单宁宁;;H-2Kd基因siRNA表达质粒的构建与鉴定[A];第四届全国临床检验学术会议论文汇编[C];2006年

6 董茂龙;陈璧;徐明达;朱雄翔;胡大海;;抑癌基因P27真核细胞表达质粒的构建[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年

7 吴晓燕;雏文田;王琛;徐利;田竹芳;姚丽丽;朱本章;;人TSH受体胞外段高效表达质粒的构建,蛋白表达、纯化及活性检测[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年

8 庄学伟;邹雄;张义;王洪春;杨晓静;单宁宁;;H-2Kd基因siRNA表达质粒的构建与鉴定[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

9 邵喜英;曹江;苏丹;牟翰舟;王晓稼;;野生型PCDNA3．1(+)-CYP19基因表达质粒构建[A];2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2007年

10 庄学伟;夏西燕;单宁宁;王洪春;张义;杨晓静;李晓丽;赵胜梅;邹雄;;H-2Kd基因siRNA表达质粒的构建及在小鼠LAK细胞的表达[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 顾俊莲;锌联合Si-mdm2与P53共表达质粒（Pmp53）抗前列腺癌的实验研究[D];吉林大学;2014年

2 董翔;Alzheimer病Aβ_（3-10）和CpG基因表达质粒的构建和表达鉴定[D];中国医科大学;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 陈玮;mIL-12双亚基共表达质粒的构建及在体内外的表达[D];浙江大学;2001年

2 摆茹;SARS-CoV主要结构蛋白基因共表达质粒的构建及其免疫原性研究[D];宁夏医学院;2005年

3 王娜;TACO特异性siRNA靶向载体系统的构建及鉴定[D];南昌大学;2011年

4 郭晓兰;HBVPreS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建及其体外表达研究[D];重庆医科大学;2003年

5 唐春晖;LMP-1与LMP-3真核双表达质粒的构建及体外表达[D];重庆医科大学;2010年

6 张海红;Survivin及其剪切体表达质粒的构建、相关蛋白质表达和生物活性研究[D];吉林大学;2006年

7 刘青春;重组共表达载体pSNAV2.0-HSV1-tk-IRES-hIL-1Ra的构建及其在滑膜细胞中的表达[D];山东大学;2009年

8 郭盟华;重组人白细胞介素18表达质粒的构建、蛋白的表达和纯化研究[D];吉林大学;2006年

9 任莉;HIV-lgp120基因片段的克隆、表达、纯化、鉴定和初步应用[D];河北医科大学;2003年

10 卢迪;巯基烷基化壳聚糖介导共表达质粒pIRES-hVEGF_（121）cDNA/hBMP4体外转染的研究[D];安徽医科大学;2010年

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本文编号：950833