TNF-α增强人脐带间充质干细胞条件培养基的体外造血支持功能

发布时间：2017-10-01 01:01

  本文关键词：TNF-α增强人脐带间充质干细胞条件培养基的体外造血支持功能

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【摘要】：目的:研究肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)刺激后所得的脐带间充质干细胞条件培养基对脐血CD34+细胞在半固体培养基中集落形成个数及种类的影响。方法:将3～6代人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)以2×106接种到75cm2培养瓶中,其中刺激组加入TNF-α(10 g/L),48 h后收集上清作为条件培养基。Real-time PCR检测hUC-MSCs中各类造血因子mRNA的表达量。密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,磁珠分选CD34+细胞,流式细胞术检测细胞纯度后分5组接种到6孔板内:TNF-α刺激hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;hUC-MSC上清+不完全甲基纤维素培养基;TNF-α+DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基;完全甲基纤维素培养基;DMEM/F12完全培养基+不完全甲基纤维素培养基。10 d后显微镜下计数各类集落形成单位(colony-forming unit,CFU)的数目,收集集落形成细胞,流式细胞术检测其表型特征。结果:(1)TNF-α刺激后hUC-MSCs中粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)和白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)mRNA表达上调。(2)两种条件培养组均可见粒系CFU(granulocyte CFU,CFU-G)、巨噬系CFU(macrophage CFU,CFU-M)和粒巨噬系CFU(granulocyte-macrophage CFU,CFU-GM),但TNF-α刺激组CFU-G和CFU-M的数目约为未刺激组的1.5倍,CFU-GM约为未刺激组的2倍;阳性对照组中除粒系、巨噬系集落外还可见红系集落;而DMEM/F12完全培养基加或不加TNF-α组10 d后均未见集落形成。(3)流式细胞术检测TNF-α刺激组与未刺激组集落细胞表型CD14、CD45和CD11b,未见明显差异。结论:hUC-MSC上清作为条件培养基可在体外促进CD34+细胞分化增殖为髓系细胞,具有造血支持作用,TNF-α刺激后此作用增强。
【作者单位】： 暨南大学第一临床医学院血液病研究所;中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心;中国医学科学院 北京协和医学院血液学研究所 实验血液学国家重点实验室;
【关键词】： 间充质干细胞 肿瘤坏死因子α 造血支持
【基金】：国家重大科学计划“973计划”(No.2011CB964800)
【分类号】：R363
【正文快照】： 造血干/祖细胞的获得及恢复一直被认为是各类血液肿瘤治疗的关键,体外扩增造血干细胞后回输到长期化疗患者体内是主要治疗手段,早期的实验通过在长期培养体系中加入各种细胞因子如干细胞因子(stem cell factor,SCF)、白细胞介素(interleu-kin,IL)-3、IL-6、IL-1等来促进CD34+

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 毛文哲;许超;李扬秋;陈少华;柳菁;刘俊;廖继东;;长期培养的人脐带间充质干细胞PCNA、IL-6、IL-11和galectin-3的表达[J];中国病理生理杂志;2012年06期

2 莫世静;童秀珍;钟茜;邓宇斌;;骨髓间充质干细胞通过上调EPO表达减轻缺氧损伤引起的PC12细胞凋亡[J];中国病理生理杂志;2013年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 李田;李小毛;陈少宏;许成芳;张琪;;不同冻存液对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响[J];器官移植;2013年05期

2 曾慧兰;卜欠欠;陈慧中;覃永亮;李阳;柏小芬;钟启;余泮熹;刘宏伟;刘革修;苏泽轩;;尼古丁对人脐带间充质干细胞增殖和迁移的影响[J];中国病理生理杂志;2013年05期

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本文编号：951393