优化宿主菌在重组系统中构建大容量天然噬菌体抗体库

发布时间：2017-10-02 03:27

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【摘要】：制备大容量天然噬菌体抗体库。从健康成人外周血和新生儿脐带血中提取淋巴细胞总RNA,反转录后PCR分别扩增抗体重链和轻链基因。将获得的基因片段通过overlap PCR连接为单链抗体基因(scFv),限制性内切酶酶切后连入pDAN5a载体中,连接产物转化大肠杆菌XL2-blue MRF’。与XL1-blue菌株相比,初级库库容增加了3.9倍。再将初级库噬菌体感染含有Cre重组酶的大肠杆菌BS1365,抗体基因在重组酶作用下发生同源重组,最终得到库容为1.7×1011的噬菌体抗体库。经检测,该抗体库多样性良好,利用该库可获得针对6种抗原的抗体。以上结果表明,应用XL2-blue MRF’作为抗体基因的转化宿主,提高了噬菌体抗体库的库容,获得的抗体库可用于下一步抗体药物的筛选。
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室;
【关键词】： 噬菌体展示 抗体库 重组系统 宿主菌
【基金】：科技部国际合作项目(2010DFB32900) 国家自然科学基金重点项目(81030056) 教育部“长江学者和创新团队发展计划”创新团队(IRT1007) 博士点基金(20111106110030)
【分类号】：R392
【正文快照】： 20世纪90年代中期以来,抗体药物在新药中崭露头角。经过近20年的发展,治疗性单克隆抗体药物已经成为重要的临床药品种类,并在肿瘤、自身免疫性疾病、移植排斥疾病等的治疗中发挥着传统药物不可替代的作用[1]。制备抗体药物主要通过人源化(humanized)及全人源(fully human)技

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本文编号：957312