犬脐静脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定

发布时间：2017-10-02 15:11

  本文关键词：犬脐静脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定

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【摘要】：目的建立一种简便、高效的犬脐静脉血管内皮细胞分离方法,并进行培养和鉴定。方法无菌条件下取12只新生比格犬脐带共12根,脐带长(13.0±1.5)cm。PBS液冲洗后,各取4根脐带注入1%Ⅰ型胶原酶分别消化脐静脉5、7、10 min后,收集细胞并行锥虫蓝计数;倒置相差显微镜下观察细胞形态,待细胞爬满培养瓶后以1∶2比例传代。取Ⅰ型胶原酶消化7 min获得的第3代细胞,通过免疫荧光染色和流式细胞仪检测细胞中血管假性血友病因子(vonWillebrand factor,vWF)和血小板-内皮细胞黏附分子CD31表达,进行细胞鉴定;MTT检测细胞增殖。结果消化5、10 min后未收集到或偶尔收集到血管内皮细胞;消化7 min可见大量血管内皮细胞,培养24 h后细胞呈多角形,随培养时间延长细胞逐渐呈"铺路石"样生长,细胞核较大,多为单核,少数细胞为双核,传代后细胞形态无明显变化。荧光倒置显微镜下观察,培养细胞vWF和CD31表达阳性;流式细胞仪检测示培养细胞vWF阳性表达率为99.0%±0.7%,CD31阳性表达率为98.0%±1.2%,提示培养细胞为血管内皮细胞。MTT检测示,随培养时间延长,血管内皮细胞增殖速度明显提高。结论采用酶消化法从犬脐静脉中分离培养血管内皮细胞操作简便,且细胞数量多、纯度高。
【作者单位】： 解放军总医院第一附属医院烧伤研究所;
【关键词】： 血管内皮细胞 脐静脉 细胞培养 细胞鉴定 犬
【基金】：全军医院重大高新技术项目(2010GXZS095) 首都医学发展科研基金资助项目(2009-2040)~~
【分类号】：R329
【正文快照】： 在烧、创伤等多种疾病的病理生理改变中,血管内皮细胞发挥了关键作用,如血管通透性改变、白细胞黏附、炎性细胞及血小板的黏附与聚集等[1-4],所以血管net/kcms/detail/51.1372.R.20130318.1726.016.html内皮细胞一直是烧、创伤研究的重点内容之一。脐静脉是体外提取血管内皮

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【共引文献】

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本文编号：960277