弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析

发布时间：2017-10-08 05:28

  本文关键词：弓形虫棒状体蛋白18的原核表达及免疫分析

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【摘要】：目的克隆刚地弓形虫ROP18基因,进行原核表达及重组蛋白的免疫分析。方法提取弓形虫RH株基因组DNA,经PCR获得ROP18基因片段,经双酶切分别连入原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+),构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。IPTG诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳及Western-blot检测。结果 PCR得到约1 665bp目的基因片段,单、双酶切及PCR鉴定结果显示成功构建重组表达载体pET28a-ROP18和pET32a-ROP18;经IPTG诱导后,ROP18基因在大肠杆菌中高效表达;SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,pET28a-ROP18在相对分子质量约60kD的位置出现目的蛋白条带,pET32a-ROP18在相对分子质量约83kD的位置出现目的蛋白条带,均与理论值相符;Western-blot结果显示重组蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清具有特异免疫反应性。结论成功克隆和表达了ROP18基因,所表达的重组蛋白具有免疫效应,为其功能研究奠定基础。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系;
【关键词】： 刚地弓形虫 棒状体蛋白 基因克隆 原核表达 免疫分析
【基金】：国家自然科学基金(No.30972578,31030066) 教育部博士点项目(No.20094433120013,20094433120016) 广东省自然科学基金(No.9151051501000075) 广东省“大学生创新实验计划”项目(No.1212110025,1212110027) 南方医科大学大学生课外科研项目(Nos.2010kw082,GWXS20110101,GWXS20110205)~~
【分类号】：R382.5
【正文快照】： 弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种机会性细胞内寄生原虫,能寄生于人和多种动物的有核细胞内引起人兽共患的弓形虫病。弓形虫呈世界性分布,人群普遍易感,多呈隐性感染,但在免疫抑制或免疫缺陷患者中(如长期使用免疫抑制剂、恶性肿瘤、AIDS等)可引起严重的器官损害(多见于脑和眼

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本文编号：992267