AICAR和Compound C减轻内毒素血症肝脏损伤的作用与机制

发布时间：2017-11-29 18:34

  本文关键词：AICAR和Compound C减轻内毒素血症肝脏损伤的作用与机制

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【摘要】：背景： 内毒素血症具有高死亡率和治愈率低的特点，因而在临床工作中被认为是十分棘手的问题。当前认为感染，外科创伤，烧伤，肠道细菌移位等是诱发机体产生内毒素血症的主要因素。LPS作为细菌诱导内毒素血症最主要的成分，可激活机体非特异性免疫细胞，诱导大量的促炎细胞因子及趋化因子的产生，造成多器官功能损伤和障碍，尤其是肝脏组织的损伤和功能障碍。近来，AICAR作为AMPK的特异激活剂应用于研究结肠炎，哮喘等动物模型并发现AMPK通路表现抑制炎症反应的作用。然而，激活或抑制AMPK通路可否抑制内毒素诱导的免疫反应紊乱和肝脏损伤还有待阐明。 目标： 研究AMPK激活剂AICAR和抑制剂Compound C对于LPS诱导的小鼠肝脏损伤模型的作用。 方法： (1)体外培养RAW264.7巨噬细胞，经AICAR和/或Compound C刺激后western blot检测p-AMPK的表达。 (2)将RAW264.7巨噬细胞分为5组，对照组，LPS组（LPS100ng/ml），LPS+AICAR组（AICAR1mM预处理RAW264.7巨噬细胞1h后加入LPS100ng/ml），LPS+Compound C组（Compound C50μM预处理RAW264.7巨噬细胞1h后加入LPS100ng/ml），及LPS+AICAR+Compound C组（AICAR1mM与Compound C50μm预处理RAW264.7巨噬细胞1h后加入LPS100ng/ml）。1h后western blot检测p-NF-κB p65的表达。 (4) BALB/c小鼠随机分为5组：对照组（腹腔注射生理盐水）LPS组（腹腔注射LPS2mg/kg)，LPS+AICAR组（腹腔注射AICAR500mg/kg1h后注射LPS2mg/kg)，LPS+Compound C组（腹腔注射Compound C20mg/kg1h后注射LPS2mg/kg)，LPS+AICAR+Compound C组（腹腔注射AICAR500mg/kg及Compound C20mg/kg1h后注射LPS2mg/kg）。LPS注射12h后处死小鼠，取小鼠血清及肝脏组织进行实验研究。 (5)小鼠生存率实验：BALB/c小鼠随机分为5组（按之前方法分组，LPS腹腔注射量为20mg/kg，AICAR及Compound C注射量同上），24小时内观察各组小鼠的生存情况。 结果： (1) AICAR可促进巨噬细胞AMPK磷酸化，Compound C可阻断AICAR激活AMPK磷酸化。AICAR及Compound C均可抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞NF-κB活化。 (2) LPS可诱导小鼠肝脏功能损伤，包括血清ALT、AST升高，，血清TNF-a含量升高，肝脏组织病理损伤，诱导肝细胞凋亡，通过检测CD68表达及肝脏MPO含量反应出肝脏巨噬细胞和中性粒细胞活化程度。 (3) AICAR和Compound C治疗LPS诱导的内毒素血症模型小鼠，均可以减少血清ALT、AST，及TNF-α含量，降低肝脏组织病理损伤，抑制诱导肝细胞凋亡及肝脏巨噬细胞和中性粒细胞活化。 (4)在致死实验中，AICAR和Compound C可明显提高LPS诱导小鼠的24h生存率。 结论： AICAR和Compound C分别激活、抑制AMPK活化均可缓解LPS诱导的小鼠肝脏免疫反应及组织损伤，AMPK通路可能成为临床上治疗内毒素血症的新选择。
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R459.7

【参考文献】

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1 姚烽;汲广岩;张力;;腺苷酸活化蛋白激酶:炎症调控新靶点[J];生理学报;2012年03期

2 郭媛;魏筱华;谢s

本文编号：1237725