急性肝衰竭大鼠模型肠道防御素-5、分泌型磷脂酶A2和溶菌酶表达变化及与细菌移位的关系

发布时间：2020-10-17 07:06

　　 目的： 探讨急性肝衰竭（ALF）大鼠模型肠道防御素-5(RD-5)、分泌型磷脂酶A2（sPLA2）和溶菌酶(Lysozyme)表达变化及与细菌移位的关系。 方法： 清洁级常规喂养雄性SD大鼠，1周后随机分为正常对照组和ALF模型组。正常对照组8只，腹腔注射0.9%氯化钠溶液1.2ml/100g；ALF模型组40只，按造模后不同观察时间点分为8、16、24、48、72小时5个时间亚组，每组8只，一次性腹腔注射10%D-氨基半乳糖1.2ml/100g。于各相应时间点处死大鼠，进行以下指标检测：①取各组肝、脾和肠系膜淋巴结组织匀浆进行细菌培养；②检测血清ALT、AST、Tbil、Alb水平；③肝组织和末段回肠组织经HE染色后光镜下观察病理变化；④RT-PCR法检测各组末段回肠RD-5、sPLA2、LysozymemRNA表达；⑤Western blot和免疫组化法检测sPLA2和Lysozyme蛋白表达。组间均数比较采用单因素方差分析。 结果： 1、急性肝衰竭模型组ALT、AST逐渐升高，于48h达到高峰，并出现总胆红素明显升高，随后转氨酶下降，总胆红素继续上升。模型组72h肝脏组织正常结构消失，呈大片融合坏死，超过整个切片面积的2/3，残留少量肝细胞，汇管区及坏死区可见大量炎性细胞浸润，肝窦充血、出血明显，符合急性肝衰竭病理改变，成功诱导急性肝衰竭模型。 2、正常对照组未出现脏器细菌培养阳性，模型组24h、48h和72h脏器细菌移位率分别为8.3%、37.5%和58.3%，但是，72h大鼠模型的末端回肠结构尚完整，未见粘膜上皮细胞明显脱落坏死情况。 3、模型组大鼠回肠RD-5、sPLA2mRNA在早期逐渐升高，16h上升至高峰（1.291±0.153、1.131±0.128），与对照组（0.725±0.116、0.722±0.112）比较差异有统计学意义（t=69.25、95.71，均P=0.000），随后逐渐下降，72h（0.415±0.104、0.425±0.076）明显低于对照组（t=31.55、44.98，均P=0.000）；对照组LysozymemRNA为0.853±0.093，模型组早期亦升高，8h上升至高峰(1.211±0.107)，最后下降，72h(0.704±0.103），明显低于对照组（t=9.224；p=0.009）。Western blot法检测sPLA2和Lysozyme蛋白表达，对照组分别为0.583±0.121和0.650±0.093，模型组72h分别为0.327±0.086和0.382±0.057，均明显低于对照组（t=12.28、15.83，p=0.004、0.001）。sPLA2蛋白在对照组回肠潘氏细胞内呈粗颗粒棕色信号，而在模型组72h时仅可见少量点状棕色信号分布；Lysozyme蛋白在对照组回肠所有潘氏细胞中呈粗颗粒强信号，而在模型组72h时在部分潘氏细胞中呈散在点状信号。 结论： 急性肝衰竭大鼠模型的回肠粘膜免疫屏障功能下降，随着潘氏细胞RD-5、sPLA2和Lysozyme的表达下降，脏器细菌移位率增加，且不伴有明显肠粘膜损伤的发生。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R575.3
【部分图文】：

图 1 肝脏和末段回肠组织病理检查结果和末段回肠 sPLA2、Lysozyme 蛋白的表达。A常对照组肝脏（HE×200）；B：模型组 72h 肝脏（HE×200）；C：正常对照组末段回肠HE×200）；D：模型组 72h 末段回肠（HE×200）；E：正常对照组回肠 Lysozyme 蛋白的达（DAB ×400）；F：模型组 72h 回肠 Lysozyme 蛋白的表达（DAB ×400）；G：正常照组回肠 sPLA2 蛋白的表达（DAB ×400）；H：模型组 72h 回肠 sPLA2 蛋白的表达（DA400）。

第 3 章 结果计学意义（t=69.25、95.71，均 P<0.01），随后逐渐下降，72h（0.41.076）明显低于对照组（t=31.55、44.98，均 P<0.01）；对照组 为 0.853±0.093，模型组早期亦升高，8h 上升至高峰（1.211±0.172h(0.704±0.103）明显低于对照组（t=9.224；p<0.01）

3 Western blot 检测末段回肠 sPLA2、Lysozyme 蛋白水平。1 为正常对照组；2～6 分别型组 8、16、24、48、72h。与对照比相比，**P<0.01，*P<0.05。.6 急性肝衰竭大鼠末段回肠 sPLA2、Lysozyme 蛋白免疫组织化学色sPLA2、Lysozyme 蛋白分布于肠隐窝潘氏细胞内。sPLA2 蛋白在对照组潘氏细胞内呈粗颗粒棕色信号，而在模型组 72h 时仅可见少量点状棕色信布；Lysozyme 蛋白在对照组回肠所有潘氏细胞中呈粗颗粒强信号，而在模 72h 时在部分潘氏细胞中呈散在点状信号（图 1）。
【参考文献】

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1 李钢;胡祖健;王凯诚;罗静;赵金锋;刘世宾;严萍;陈海平;;实验性重症急性胰腺炎对SD大鼠小肠防御素-5基因表达的影响[J];肝胆胰外科杂志;2007年06期

2 赵希敏;刘霞;;颅脑损伤大鼠肠道防御素-5 mRNA表达[J];临床神经外科杂志;2007年01期

3 刘冬妍;丁鹏;刘沛;;急性肝坏死动物模型肠道SIgA的变化[J];中国医科大学学报;2010年08期

本文编号：2844461