不同感染条件下MRSA致SKH-1无毛小鼠感染模型的建立及其实验研究

发布时间：2017-12-12 13:11

  本文关键词：不同感染条件下MRSA致SKH-1无毛小鼠感染模型的建立及其实验研究

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【摘要】：目的：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)是一种具有多重耐药性的致病菌,普遍流行于世界各地,其感染的高发病率和致死率,已成为医学界的一个普遍难题。烧烫伤患者的机体免疫力低下,极易继发感染MRSA,常可增加临床治疗的难度,导致较高的死亡率。因此,本实验采用不同的感染方法,分别探讨了建立烫伤后合并MRSA感染模型的实验条件,在国内首次采用SKH-1无毛小鼠建立了较为符合临床感染实际的烫伤后合并MRSA感染模型。所建立的感染模型对进一步开展烫伤后合并MRSA感染的临床研究及拓展SKH-1无毛小鼠的研究应用范围具有重要意义。方法：第一部分：模型一：15只SPF级SKH-1无毛小鼠随机分为对照组、A组、a组、B组、b组。A组、a组、B组、b组小鼠采用预加热(100℃)的铜块烫伤,其中A组和a组烫伤40s,B组和b组烫伤60s,再分别给A组和B组小鼠表面接种109CFU/只(MRSA-ST239),a组和b组小鼠接种108CFU/只(MRSA-ST239)。模型二：48只SPF级SKH-1无毛小鼠随机分为PBS对照组、模型组和治疗组,模型组和治疗组小鼠采用预加热(100℃)的铜块烫伤40s,切痂后接种108CFU/只MRSA,并对治疗组小鼠尾静脉注射替考拉宁。模型三：48只SPF级SKH-1无毛小鼠随机分为对照组、烫伤合并感染组(D组)、单纯感染组(E组)和单纯烫伤组(F组),D组小鼠采用预加热(100℃)的纱布(3×5cm)烫伤30s后予以MRSA气溶胶攻击的方式建立模型。以上3种模型,分别采用体重、菌血症率、血常规、皮肤及脏器荷菌量和病理组织学变化等指标,对模型进行综合评价。第二部分：48只SKH-1无毛小鼠,随机分成PBS对照组,单纯感染组和烫伤合并感染组。合并感染组小鼠采用预加热(100℃)的纱布(3×4cm)烫伤30s后,再予以MRSA气溶胶攻击。采用体重、血常规、菌血症率、皮肤和脏器荷菌量、病理组织学变化和分子生物学等指标对模型进行综合评价。结果：第一部分：模型一：与对照组相比,A组、a组、B组、b组小鼠体重显著下降；A组、a组、B组、b组小鼠感染后2d,菌血症发生率均为100%；感染后10d,各组小鼠皮肤荷菌量均108CFU/ml;组织病理学观察,A组、a组、B组、b组小鼠皮肤出现明显炎症病变。模型二：与对照组相比,模型组和治疗组小鼠体重均下降极显著(p0.01)；模型组小鼠生存率为50%,治疗组小鼠生存率为60%；模型组和治疗组小鼠菌血症发生率均较高(100%)；MRSA在模型组和治疗组小鼠各脏器均有不同程度的播散；模型组小鼠皮肤可见多发性溃疡及脓肿,镜下观察炎症细胞浸润及脓肿灶明显。模型三：与对照组相比,D组小鼠体重下降极显著(p0.01)；感染后2d,D组菌血症率为100%；D组白细胞数、中性粒细胞数极显著增多(p0.01)；皮肤荷菌量达108CFU/g,市荷菌量达107～106CFU/organ;组织病理学观察,皮肤为深Ⅱ度烫伤,大量炎症细胞浸润,肺部出现支气管肺炎病变。第二部分：与其他两组相比,合并感染组小鼠第3天体重下降明显(p0.05)；白细胞数显著增多(p0.01)；菌血症率达100%；皮肤和肺荷菌量较高,分别达108CFU/g和106CFU/g；镜下观察皮肤表皮层脱落,真皮层凝固性坏死,且大量炎症细胞浸润,感染后期可见结缔组织增生,肺部为典型的支气管肺炎病变,脾脏呈败血脾改变；免疫组化结果显示皮肤组织内CD138呈阳性表达；multi-PCR测定感染组织内nuc和mecA基因均为阳性。
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R644;R-332

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本文编号：1282607