VEGF基因修饰后人脂肪干细胞上清对成纤维细胞及内皮细胞的影响

发布时间：2017-12-12 18:33

  本文关键词：VEGF基因修饰后人脂肪干细胞上清对成纤维细胞及内皮细胞的影响

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【摘要】：研究背景:慢性创面患者人数的增加已成为一个重要的社会和经济问题,人脂肪干细胞(HADSCs)可以分泌多种生长因子并可用于创面治疗,现我们试图通过慢病毒携带血管内皮生长因子(VEGF)基因转染于HADSCs,获得VEGF的稳定分泌。目的:为探索一种有效的创面治疗方法,我们使用慢病毒携带VEGF基因修饰HADSCs,检测其上清液中VEGF的表达,并用其上清液作用于创面愈合关键细胞,观察其对人皮肤成纤维细胞(HDFs)及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移的影响。材料及方法:1、通过胶原酶消化法从人脂肪中提取HADSCs,经流式细胞仪检测其表面标志物,并进行成脂、成骨、成软骨多向诱导;2、将携带VEGF基因的慢病毒转染于HADSCs,以GFP作为报告基因分析转染效率,并定时收集上清液,通过ELISA法检测上清中蛋白分泌情况。3、将不同组HADSCs-CM作用于HDFs及HUVECs,通过CCK-8法检测细胞增殖,划痕法检测细胞迁移能力。结果:1、经过0.1%的Ⅰ型胶原酶消化法可方便、有效地提取出HADSCs,经流式鉴定显示CD90、CD29、CD44、CD105为(+),CD45、CD106为(-),并可成功多向诱导。2、通过GFP荧光可观察,发现VEGF可稳定转染于HADSCs,ELISA结果显示其VEGF及b FGF分泌提高并维持在较高水平。3、当完全培养基混合与VEGF-HADSCs-CM以1:2的比例混合时对成纤维细胞及内皮细胞的增殖及迁移有明显的促进作用。结论:HADSCs容易获取,含量丰富,是组织工程理想的种子细胞。慢病毒携带VEGF基因可成功转染于HADSCs,通过蛋白质相互作用使HADSCs-CM中的VEGF及b FGF表达明显提高,提取转染后VEGF-CM作用于体外创面愈合相关的成纤维细胞及内皮细胞有明显促增殖、迁移能力,提示应用其治疗慢性创面的潜能。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R641
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本文编号：1283545