2种干细胞微创移植调控颅脑创伤后炎症反应的研究

发布时间：2017-12-15 10:00

  本文关键词：2种干细胞微创移植调控颅脑创伤后炎症反应的研究

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【摘要】：第一部分2种移植方法对宿主和移植物的影响目的观察NSCs两种移植方法对宿主和移植物的影响。方法分离培养C57BL/6胎鼠NSCs,用Brd U标记后将等量NSCs用两种方式移植到同品系成年小鼠两侧大脑内,左侧用磨钻钻孔颅骨,右侧用微量进样器穿刺颅骨。移植后用随机数字表法在各时间点处死动物(n=6),观察大体形态和病理染色,对比两侧移植后脑损伤。用免疫荧光抗体CD11b、CD3和CD19标记小胶质/巨噬细胞、T细胞和B细胞,观察炎性细胞浸润,对比两侧炎症反应。用免疫荧光抗体BrdU、NeuN、GFAP标记移植物、神经元和星形胶质细胞,对比两侧细胞分布。结果1.左侧大脑破坏程度较右侧严重。移植后1~3 d,左侧大脑内神经元坏死明显,可见大量红细胞外溢和炎性细胞浸润;7 d后该侧瘢痕组织明显增多并超过对侧。2.左侧大脑内炎性细胞浸润较右侧明显,小胶质/巨噬细胞百分率在早期明显升高,随后T细胞也逐渐增多,B细胞在移植21 d后浸润较明显。3.在各时间点,右侧大脑移植区内BrdU阳性细胞百分率较左侧高(P0.05)。4.在各时间点,左侧大脑移植区内星形胶质细胞百分率较右侧高,神经元百分率较右侧低(P0.05)。结论用微量进样器穿刺颅骨移植NSCs能从以下几方面改善移植物功能:减小移植操作造成的机械性损伤、炎症介导的继发性损伤,减少移植细胞外溢,提高移植效率。第二部分2种干细胞微创移植调控颅脑创伤后炎症反应的研究目的观察NSCs、MSCs微创移植调控TBI后炎症反应的异同。方法按随机数字表将成年雄性C57BL/6小鼠分为:假手术组(n=54)和TBI组(n=210)。用自由落体装置制备TBI小鼠模型,在造模后12 h行NSS评分,按随机数字表将评分为3~7者,分为3组(n=54)。造模后24 h将C57BL/6小鼠成体NSCs、MSCs微创移植到小鼠TBI模型脑内,以注射等量PBS为对照组。移植后1 d、3 d和7 d处死动物,用病理染色观察脑损伤,用免疫荧光抗体CD11b、CD3和CD19染色观察炎性细胞浸润,提取脑内m RNA、蛋白质检测细胞因子表达,分析2种干细胞调控作用的异同。结果1.NSCs、MSCs移植后7 d脑损伤情况较PBS组局限,组织渗出、水肿减少。2.NSCs、MSCs移植后3 d、7 d,脑内小胶质/巨噬细胞浸润数量明显少于PBS组(P0.05);NSCs移植后7 d,脑组织内T细胞浸润数量明显少于PBS组(P0.05)。3.MSCs移植后IL-6、TNF-α的mRNA、蛋白质表达水平在各时间点均低于PBS组(P0.05);NSCs移植后IL-10的mRNA表达水平在1 d、3 d明显高于PBS组(P0.05),其蛋白表达水平在3 d、7 d较PBS组、MSCs组高(P0.05)。结论NSCs与MSCs影响了TBI后免疫细胞浸润和细胞因子表达。二者调控作用相似处为均能抑制小胶质/巨噬细胞浸润;不同之处为NSCs还可抑制T细胞浸润并上调了IL-10的水平,而MSCs下调了促炎因子IL-6、TNF-α的水平。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R651.15

【参考文献】

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1 冯挺眉;吴聪;顾永耀;;自然杀伤性T细胞在恶性胸腔积液疾病中的分布及其趋化因子受体的表达和意义[J];免疫学杂志;2011年01期

2 周宪宾;姚成芳;;巨噬细胞M1/M2极化分型的研究进展[J];中国免疫学杂志;2012年10期

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本文编号：1291522