盐酸右美托咪定预处理对大鼠高氧急性肺损伤的作用研究

发布时间：2018-01-30 16:42

  本文关键词： 盐酸右美托咪定 高氧 肺损伤 PI3K/AKT 转导通路　出处：《遵义医学院》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:1.建立大鼠高氧性急性肺损伤模型并进行效果评价。2.观察不同剂量的盐酸右美托嘧啶对大鼠高氧急性肺损伤的作用及是否具有剂量依赖性。3.PI3K/Akt信号传导通路在右美托咪定对大鼠高氧急性肺损伤中的作用。方法:1.建立大鼠高氧急性肺损伤模型并进行效果评价。将80只SD大鼠随机分为空气组和高氧组,按照吸氧时间不同高氧组又随机分为24h组、48h组、72h组3个亚组,共4组,每组20只;空气组放置于空气中喂养,高氧组放置于高氧箱中喂养,高氧箱中温度设置在25℃,箱中湿度保持在50%,高氧箱中氧浓度持续保持在90%,箱内CO2浓度小于0.5%;箱内放置钠石灰、无水氯化钙、温度计、湿度计;每天持续不间断给氧,分别在各时间点观察大鼠精神状态、进食、大鼠皮肤黏膜等大体情况。空气组和高氧组各时间点分别抽大鼠动脉血进行血气分析。打开胸腔显露肺组织,肉眼观察肺组织大体情况;取左下肺组织浸泡于10%福尔马林标本固定液中,行HE染色,光镜下观察肺组织病理学变化情况,并进行肺病理评分。取出完整的右肺组织用纸巾迅速拭干肺表面的血液及水分,放置于电子天平秤上测量湿/干(W/D)质量比值;检测血浆TNF-α和IL-1β、IL-6浓度变化情况。2.观察不同剂量的盐酸右美托咪定对大鼠高氧急性肺损伤的作用是否具有剂量依赖性。建立大鼠高氧急性肺损伤模型,将动脉血气分析、肺组织病理学检查、肺细胞早期凋亡率作为评判指标,讨论不同剂量的盐酸右美托咪定对大鼠高氧急性肺损伤的作用是否有剂量依赖性。将80只健康SD大鼠随机分为4组,即高氧肺损伤(HALI)组即(H组)、盐酸右美托咪定2.5μg/(kg·h)组(DL)、盐酸右美托咪定5μg/(kg·h)组(DM)、盐酸右美托咪定10μg/(kg·h)组(DH),4组大鼠分别置于高氧箱中喂养48h后取标本检测。DL组给予右美托咪定2.5μg/(kg·h),加入到20ml 5%葡萄糖注射液中,0.5ml/h,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱;DM组给予右美托咪定5μg/(kg·h),加入到20ml 5%葡萄糖注射液中,0.5ml/h,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱;DH组给予右美托咪定10μg/(kg·h)加入20ml 5%葡萄糖注射液中,0.5ml/h,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱;H组给予等量的糖水,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱。48h后造模结束,把各组大鼠从箱中取出,分别麻醉,逐一取颈动脉血,行血气分析,分别计算氧合指数(OI)、呼吸指数(RI);将左下肺组织置于10%福尔马林标本固定液中,行HE染色,光镜下观察肺组织病理变化情况,并做肺病理评分;取右肺组织用流式细胞仪检测法检测肺细胞早期凋亡率。3.PI3K/Akt信号传导通路在右美托咪定对大鼠高氧急性肺损伤的作用。将80只健康SD大鼠随机分为4组,即:高氧肺损伤(HALI)组即(H组)、DM(右美托咪定)组、WD(渥曼青霉素+右美托咪定)组、W(渥曼青霉素)组,将4组大鼠分别置于高氧箱中喂养。DM组给予右美托咪定5μg/(kg·h),加入20ml5%葡萄糖注射液中,0.5ml/h,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱;WD组给予渥曼青霉素+右美托咪定,入高氧箱前先尾静脉缓慢注射渥曼青霉素30μg/kg,后将右美托咪定5μg/(kg.h)加入到20ml5%葡萄糖注射液,0.5ml/h,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱。W组先给于30μg/kg的渥曼青霉素,尾静脉缓慢注射,后给予等量的5%葡萄糖注射液,0.5ml/h,尾静脉持续泵入,立刻入高氧箱。H组给予等量、等速度的5%葡萄糖注射液,尾静脉持续泵入,立刻后入高氧箱。48h后造模结束,将各组大鼠取出,分别麻醉处死,打开胸腔,分别取出左右肺组织。将左肺放置于10%福尔马林标本固定液中,行HE染色,光镜下观察各组大鼠肺病理变化情况,并进行肺病理评分,将右肺用western blotting法检测PI3K、AKT、P-Akt、GSK-3β、P-GSK-3β蛋白表达量。结果:1.(1)肺组织大体观察结果空气组,肺组织颜色均匀,呈粉红色,未见出血点、组织水肿及坏死表现,用手触摸肺组织较柔软有弹性。高氧组24h肺组织呈淡红色,表面有极少量的、散在的,大小不等的点状出血;高氧48h肺组织略显暗红,充血较明显,略显水肿,伴有少量的点状或小片状出血点;高氧72h肺组织损伤较严重,呈暗红色,肺组织明显水肿,肺表面可见多处斑片状出血,个别损伤严重的,胸腔可见透亮的或淡红色的胸腔积液,甚至口鼻处出现血性分泌物。(2)肺组织HE染色结果及肺病理评分空气组肺泡结构清晰完整,肺泡大小均匀,肺泡壁光滑,肺泡腔内未见白细胞及渗出物,肺泡间隔无增宽,无炎性细胞浸润;高氧组24h肺泡结构较清晰,肺泡腔内有少量渗出液伴有少量红细胞漏出,极少数有毛细血管扩张,肺泡间隔稍增厚;高氧48h肺泡腔内渗出液明显增多,有部分红细胞漏出,肺组织毛细血管扩张明显,少数肺泡腔变大,肺泡间隔明显增厚,多数肺泡间隔断裂伴有大量WBC渗出;高氧组72h大鼠肺组织弥漫性损伤,肺组织结构显示不清,肺泡壁断裂融合成肺大泡;肺泡腔及肺间质内充满WBC,伴水肿,严重者有透明膜形成。各组肺组织病理学评分比较,DL、DM组与H组比较病理评分降低(P0.05),DM组与DL组比较肺病理评分降低差异显著(P0.05),DH组与H组比较差异无统计学意义(P0.05)。(3)血气分析空气组氧合指数(OI)无明显变化(P0.05),高氧组随高氧暴露时间延长OI逐渐降低与空气组比较(P0.05);空气组RI无明显变化(P0.05),高氧组随高氧暴露时间延长RI逐渐升高(P0.05)。(4)血浆炎性因子空气组随时间延长血浆IL-1β、IL-6、TNF-α浓度无明显改变(P0.05),高氧组随时间延长IL-β、IL-6、TNF-α浓度逐渐升高(P0.05)。(5)肺组织W/D比值空气组肺组织W/D无明显变化(P0.05),高氧组随时间延长肺组织W/D比值逐渐升高(P0.05)。2.(1)肺组织细胞早期凋亡率DL、DM组与H组比较,肺组织早期凋亡率均有降低(P0.05),但DM组与DL组比较早期凋亡率降低差异显著(P0.05),DH组与H组比较肺组织细胞早期凋亡率无明显差异(P0.05),DM与DH组比较肺组织细胞早期凋亡率降低差异显著(P0.05)。去掉超安全剂量DH组后呈线性变化趋势(P0.05)。(2)肺组织病理学变化与肺病理学评分H组肺泡结构紊乱,肺泡壁明显增厚,个别肺泡壁断裂,部分融合成肺大泡,肺泡间隔明显水肿、增宽、可见大量炎性细胞渗出;DH组肺组织结构稍紊乱,部分肺泡壁断裂,并融合成肺大泡,肺泡间隔有明显的炎症细胞浸润,表现同H组;DM组肺泡结构较清晰,肺组织少许充血水肿,呈暗红色,肺表面有少量点状出血,肺泡间隔有极少数炎性细胞浸润。各组肺组织病理学评分和病理学变化结果趋势一致。DL、DM组与H组比较(P0.05);DH组与H组比较(P0.05),DM组与DH组比较差异显著(P0.05)。去掉超安全剂量DH组后呈线性变化趋势。(3)血气分析DL、DM组与H组RI比较(P0.05);DL、DM组与H组OI比较(P0.05)。去掉超安全剂量DH组后呈线性变化趋势(P0.05)。3.(1)肺组织肺病理学变化与肺病理评分H组肺泡组织损伤面积广泛,个别肺泡结构显示不清,肺泡腔及肺间质内充满大量白细胞,伴透明膜形成。DM组扩张的肺毛细血管内充血,伴随白细胞粘附,肺泡腔内有渗出液和大量红细胞漏出。部分肺泡间隔增厚伴有肺泡间隔断裂,周围有大量白细胞聚集呈渗出改变。WD组病理学改变同H组。各组肺病理评分和肺病理学变化趋势一致。使用和未使用右美托咪定的效果有统计学差异(P0.05),使用和未使用渥曼青霉素的效果有统计学差异(P0.05),且二者存在交互作用,即渥曼青霉素能够影响右美托咪定药物作用效果(P0.05)。(2)蛋白印迹结果在PI3K_(P110)、p-AKT和p-GSK-3β的表达中,以右美托咪定为主效应结果提示P0.05,使用与未用右美托咪定的差异有统计学意义。渥曼青霉素主效应结果提示P0.05,使用与未用渥曼青霉素的差异有统计学意义;二者交互效应结果提示P0.05,即二者存在交互作用。在P13K_(P85)、AKT和GSK-3β的表达中,以右美托咪定为主效应结果提示P0.05,使用与未用右美托咪定的差异无统计学意义;渥曼青霉素主效应结果提示P0.05,使用与未用渥曼青霉素的差异无统计学意义;二者交互效应结果提示P0.05,即二者不存在明显的交互作用。结论:1.48h吸入高浓度氧90%以上能够成功复制典型的HALI模型,肺损伤于48~72h达高峰;2.5μg/(kg·h)盐酸右美托咪定能改善高氧导致的急性肺病理损伤,改善大鼠氧合指数,能显著降低肺泡早期凋亡率,其作用在安全剂量范围内具有剂量依赖性;3.PI3K/AKT信号转导通路可能参与了盐酸右美托咪定对高氧性急性肺损伤的作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R563.8

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