胍丁胺对脓毒症小鼠的肺脏保护作用及其机制研究

发布时间：2018-02-04 22:38

本文关键词： 胍丁胺脓毒症肺损伤中性粒细胞　出处：《重庆医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:建立盲肠结扎穿孔(cecal ligation puncture,CLP)模型,探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脓毒症小鼠肺组织的保护作用及其对中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)功能的影响。方法:1、将6-8周龄、雄性C57BL/6小鼠,按完全随机分组法分为三组,分别为:SHAM组(只开腹不做其他处理+生理盐水)、CLP组(CLP手术+生理盐水)、CLP+AGM组(CLP手术+200mg/kg AGM)。观察各组小鼠生存状态,记录72h内死亡数目、时间。2、将6-8周龄、雄性C57BL/6小鼠,按完全随机分组法分为三组,分别为:SHAM组、CLP组、CLP+AGM组。各组小鼠分别取建模后24h腹腔灌洗液、血液及肺组织,并对腹腔灌洗液、血液及肺组织进行菌落计数;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肺组织匀浆中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的含量;苏木精-伊红(Hematoxylin and Eosin,HE)染色观察肺病理学改变;末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated d UTP Nick-End labeling,TUNEL)检测肺组织凋亡情况;并测定肺组织湿干比。3、将6-8周龄、雄性C57BL/6小鼠,按完全随机分组法分为三组,分别为:SHAM组、CLP组、CLP+AGM组。牛鲍计数板对建模后0h、6h、12h及24h各组小鼠腹腔灌洗液进行细胞计数,并用流式检测腹腔灌洗液PMN百分比及胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量;四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测AGM作用于小鼠PMN的安全浓度;Transwell试验检测建模后24h骨髓PMN趋化功能;分离并培养小鼠腹腔PMN,检测AGM对其吞噬功能的影响。结果:1、SHAM组小鼠的生存率为100%,状态较好,活动正常,可正常饮食;CLP组小鼠建模后6h即出现死亡,72h生存率仅为16.67%,与SHAM组比较p0.001,有统计学差异;AGM治疗后小鼠生存率提高到40%,与CLP组比较p=0.027,有统计学差异。2、CLP+AGM组与CLP组比较发现:AGM治疗可明显降低脓毒症小鼠体内细菌含量[腹腔灌洗液(log CFU/ml):5.28±0.98 vs.6.85±0.58,p=0.033;血液(log CFU/ml):3.63±0.45 vs.5.73±0.83,p=0.017;肺组织(log CFU/ml):2.31±0.25 vs.3.90±0.71,p=0.018]。CLP组与SHAM组相比,CLP术后24h肺组织炎症因子及MPO水平明显升高[IL-6(pg/mg):1789.67±263.41 vs.169.00±39.04;TNF-α(pg/mg):998.67±172.14 vs.255.33±30.55;MPO(pg/mg):94.33±8.62 vs.22.00±6.56,均p0.001],并出现明显病理变化及肺水肿(肺湿干比:4.95±0.20 vs.3.60±1.45,p0.001)。CLP+AGM组与CLP组相比,炎症因子及MPO水平显著降低[IL-6(pg/mg):1226.27±123.31 vs.1789.67±263.41,p=0.007;TNF-α(pg/mg):668.00±90.60 vs.998.67±172.14,p=0.012;MPO(pg/mg):68.00±14.42 vs.94.33±8.62,p=0.021];肺损伤及水肿情况明显减轻(肺湿干比:4.39±0.10 vs.4.95±0.20,p=0.001)。荧光显微镜下观察小鼠肺组织发现:CLP组小鼠肺组织出现明显凋亡,而AGM治疗后肺组织凋亡明显减少。3、建模后24h,CLP+AGM组与CLP组相比小鼠腹腔PMN绝对数、百分比及其所产生的ROS均明显增加[PMN绝对数(×107个/ml):1.92±0.13比0.76±0.70,p0.01;PMN百分比(%):92.50±1.41 vs.78.27±4.45,p=0.02;ROS(平均荧光强度×104):11.81±2.93 vs.7.01±1.51,p=0.02];Transwell试验检测PMN趋化功能后发现:AGM治疗可显著增强CLP术后24h小鼠骨髓PMN趋化功能;小鼠腹腔PMN经AGM处理后,吞噬功能显著增强。结论:1、CLP可致小鼠脓毒症,其72h存活率仅为20%左右;AGM治疗后,脓毒症小鼠存活率为40%,明显提高。表明AGM对脓毒症小鼠有生存保护作用。2、AGM治疗可降低脓毒症小鼠体内细菌含量及肺组织炎症因子、MPO水平;还可减轻肺脏损伤及水肿,抑制细胞凋亡。表明AGM对脓毒症小鼠肺脏有明显保护作用。3、AGM能增加脓毒症小鼠感染部位PMN绝对数及百分比,同时又可增加PMN趋化、吞噬等功能。
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【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R459.7

【参考文献】