胎肝干细胞治疗不同类型F344大鼠急性肝衰竭的实验研究及大鼠门静脉分支残端

发布时间：2016-10-22 16:16

  本文关键词：胎肝干细胞治疗不同类型F344大鼠急性肝衰竭的实验研究及大鼠门静脉分支残端置管模型构建，由笔耕文化传播整理发布。

《第四军医大学》 2014年

胎肝干细胞治疗不同类型F344大鼠急性肝衰竭的实验研究及大鼠门静脉分支残端置管模型构建

刘广欣  

【摘要】：急性肝衰竭（acute liver failure, ALF）是各种肝脏疾病主要的致死原因之一，以进展迅速的肝性脑病以及严重的肝功能损害为特点。肝脏移植被认为是对急性肝衰竭最佳最有效的治疗方法，然而供肝的缺乏是严重阻碍着肝移植的广泛开展和应用的瓶颈。细胞移植因其优点也成为替代肝移植手术治疗急、慢性终末期肝病最有前景的方法[1,2]。胎肝干/祖细胞（FLSPCs）为干细胞治疗各种肝病的最理想细胞之一。本实验利用课题组之前报道的三部分离法在F344胎鼠中有效富集、纯化、体外扩增胎肝干细胞，并用pAcGFP1-N1转染干细胞，使其能表达GFP（green fluorescenceprotein, GFP）作为示踪。以同种F344大鼠作为实验对象，利用四氯化碳腹腔注射制造急性药物性肝衰竭大鼠模型、外科手术方法切除85%大鼠肝脏，制作急性肝损伤肝衰竭大鼠模型。12小时后将转染后的胎肝干细胞经尾静脉途径分别注射入上述模型体内，分选不同时间段观察肝脏修复情况。于干细胞移植后12小时后，治疗组与对照组肝功能即出现统计学意义，72小时凝血检查、病死率及肝脏病理切片检查均显示治疗组优于对照组。在验证胎肝干细胞治疗急性肝衰竭的可能性和有效性的基础上，构建大鼠肝脏断面门静脉分支的残端静脉置管模型，利用胎肝干细胞经过不同的移植途径验证新模型的优劣。肝功检查结果表明经新模型置管途径移植细胞治疗效果等同于经门静脉穿刺移植治疗效果。以此得出结论：1．三步分离法提取的胎肝干细胞具有一定改善急性肝衰竭大鼠的肝功能、凝血及肝脏病理指标的作用。2．经门静脉分支残端置管途径移植FLSPCs效果等同于经门静脉穿刺途径。 目的 1．研究移植胎肝脏原始/干细胞对治疗药物性急性肝功能衰竭及急性损伤性肝衰竭大鼠的可能性与有效性。 2．构建大鼠肝脏断面门静脉分支的残端静脉置管模型，并在实验一的基础上进行不同途径的胎肝干细胞细胞移植实验，，以此来对比分析新模型的优劣。方法 1．胎肝干细胞的富集、纯化和转染示踪 于胎龄14d的F344孕鼠中提取胎肝，经酶消化后，利用三步分离法进行FLSPCs的提取、纯化、体外扩增。并用pAcGFP1-N1转染干细胞，使其能表达GFP作为示踪。 2．急性肝衰竭动物模型的构建、干细胞的植入以及测定移植修复的指标 将80只F344大鼠分为四组。A、B组按3ml/kg予腹腔一次性注射四氯化碳(CCl4)溶液，C、D两组行肝脏85%切除，12小时后予以B、D两治疗组尾静脉注射1×106个胎肝干细胞，A、C两对照组注射等剂量培养液，在不同时间段提取四组大鼠血清，测定肝功能ALT、AST、TBIL、ALB，及凝血指标PT，统计死亡率、腹水生成量；取肝脏组织切片观察其修复情况。 3．构建大鼠肝断面门静脉分支残端的静脉置管模型，并进行胎肝干细胞的细胞移植实验，进行肝脏修复指标测试以对比分析新模型的优劣。 60只F344大鼠分为三组。E、F组行行85%肝切除术；G组行85%肝切除术+肝断面门静脉分支残端置管术。术中F组经门静脉注入4×105个表达GFP（greenfluorescence protein, GFP）的胎肝干细胞（fetal liver stem/progenitor cells, FLSPCs）。G组经留置导管注射入同等量的FLSPCs，E组注射同等剂量的培养液。72小时取血清，测定肝功能ALT、AST，统计死亡率；取肝脏组织切片观察其修复情况。统计学采用方差分析和LSD-t检验。 结果 1．三步分离法能有效从14d胎龄的F344孕鼠胚胎肝脏中富集FLSCs。细胞增殖速度快、贴壁快，细胞长满后呈铺路石样外观。细胞体积小、大小、形态均匀一致，多呈三角形或多角形，核浆比例较大。 2．在移植胎肝干细胞后12小时后，两模型组内的肝功能指标检测（ALT、AST、TBIL、ALB)即开始出现统计学差异（P0.05）。A组ALT、AST、TBIL、ALB均值分别为(5404.17±376.94)U/L、(6823±348.99)U/L、(98.43±5.21)umol/L、(24.12±1.21)g/；B组为：(4807±244.62)U/L、(5290.67±289.68)U/L、(83.67±3.501)umol/L、(26.33±1.21)g/L； C组分别为：(1946.3±106.87)U/L、(3834.5±230.05)U//L、(102.50±8.24)umol/L、(17.83±1.72)g/L； D组分别为：(1400.5±124.07)U/L、(2985±134.07)U/L、(83±7.61)umol/L、(21.33±1.86)g/L。在移植后36小时、60小时检测肝功，随时间推移B、D组肝功指标恢复改善明显优于相应对照组。60小时测PT值及腹水均分别优于两对照组（P0.01）；干细胞移植后60小时后取出肝脏行冰冻切片检查： A组损伤重、结构破坏明显，大面积肝细胞坏死，肝小叶破坏；B组较对照组明显减轻；C组肝细胞增生不明显，伴有炎细胞浸润；D组见肝细胞增生广泛，肝小叶结构恢复明显。 3．表达GFP示踪的胎肝干细胞经模型留置管道移植及经门静脉穿刺移植后72小时检测肝功能数据显示F组ALT、 AST分别为(802.83±79.22)U/L、(1463.50±56.22)U/L; G组ALT、AST分别为(827.83±63.08)U/L、(1472.83±52.41)U/L；E组ALT （1275.67±329.59)U/L、(2806.83±157.0)U/L。F组G组两者间无明显统计学差异，但均优于对照组。两者病理学检查均提示肝脏体积较对照组有所增大，肝叶代偿，镜下见肝细胞增生明显，肝索结构较完整，肝小叶结构较E组有较明显恢复。E组病理学显示剩余肝叶代偿性肿大。镜下可见肝窦及中央静脉扩张，伴有炎细胞浸润，肝细胞增生不明显。提示经门静脉分支残端置管途径移植FLSPCs治疗急性肝损伤性肝衰竭效果等同于经门静脉穿刺途径。 结论 1．三步分离法提取的胎肝干细胞具有一定改善急性肝衰竭大鼠的肝功能、凝血及肝脏病理指标的作用。 2．经门静脉分支残端置管途径移植FLSPCs效果等同于经门静脉穿刺途径，且该模型具有可反复、可选时、减少创伤等优点。

【关键词】：
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R575.3
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 苏娟,李文林,陶欣荣,朱海英,王新民,李建秀,田棣,余宏宇,Joseph T Lau,胡以平;人胎肝干细胞在重症联合免疫缺陷小鼠损伤肝脏中的植入[J];第二军医大学学报;2005年03期

2 向国安,张刚庆,方驰华,高鹏,陈开运;同种异体骨髓间质干细胞移植在大鼠肝内定居能力初步研究[J];第一军医大学学报;2005年08期

3 ;Hepatocyte differentiation of mesenchymal stem cells[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2012年04期

4 史冀华;朱盛兴;张水军;;大鼠肝部分切除术的应用解剖及实施[J];世界华人消化杂志;2008年22期

5 王满仓;商中华;张孝良;贾辰乐;;不同途径移植大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠肝硬化的治疗作用[J];中国现代医生;2010年02期

6 姚鹏,胡大荣,詹轶群,许望翔,李长燕,杨晓明;细胞生长因子体外对大鼠肝干细胞的影响[J];中华肝脏病杂志;2003年01期

7 唐晓鹏,杨旭,张旻,王文龙,陈丽敏;脐血干细胞移植治疗肝功能衰竭及心肌损害的临床与实验研究[J];中华肝脏病杂志;2005年04期

8 尤楠;陶开山;李韧;张明;高植泉;宋志;窦科峰;;HNF4α在胎肝干细胞促肝组织损伤修复中的作用[J];中国普通外科杂志;2010年01期

9 ;Diminution of toxic copper accumulation in toxic milk mice modeling Wilson disease by embryonic hepatocyte intrasplenic transplantation[J];World Journal of Gastroenterology;2005年24期

10 ;Differentiation of human umbilical cord blood stem cells into hepatocytes in vivo and in vitro[J];World Journal of Gastroenterology;2006年25期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘振昌;王栋;董金伟;;脐带间充质干细胞的生物学特性及其临床应用[J];中医药临床杂志;2011年11期

2 韩丽红,梁雪松,许莉莉,蒋雪花,徐斌;动态检测血清表皮生长因子在乙型肝炎中的意义[J];标记免疫分析与临床;2004年04期

3 唐晓鹏;张旻;陈丽敏;田沂;李异;曾妍;;脐带血单个核细胞体外培养分化为肝细胞的实验观察[J];中国输血杂志;2006年06期

4 刘梁英,李孝生;肝脏干细胞的研究现状[J];重庆医学;2004年11期

5 姚勇;曾维政;戴立里;;人脐血间充质干细胞治疗终末期肝病的进展[J];重庆医学;2012年17期

6 姚鹏;胡大荣;王帅;李树玲;胡学玲;闻炜;龚丽娟;;重型肝炎的自体骨髓干细胞肝内移植治疗评估[J];传染病信息;2009年05期

7 张敏;刘振文;张玲霞;;肝细胞移植的临床应用及前景[J];传染病信息;2010年06期

8 毛德文;张荣臻;程万里;王林;邱华;;大黄赤芍对术后肝衰竭大鼠肝细胞再生凝血功能水平的影响[J];长春中医药大学学报;2010年05期

9 金世龙;刘宝华;刘宏鸣;杨俊涛;顾红光;申海军;肖静;;大鼠成体肝卵圆细胞分离培养及诱导分化的初步研究[J];第三军医大学学报;2006年22期

10 张守华;廖彩仙;张春兴;苏俊;赖勇强;周杰;;肝细胞生长因子对c-kit~+Lin~-细胞的增殖作用[J];南方医科大学学报;2007年09期

中国重要会议论文全文数据库 前3条

1 姚鹏;胡大荣;王帅;胡学玲;闻炜;周一鸣;龚丽娟;;自体骨髓干细胞移植治疗慢性重症肝病临床研究[A];第二届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2005年

2 张新元;宁更献;侯军良;戴二黑;陈翠英;;自体骨髓干细胞移植治疗慢性肝衰竭40例临床研究[A];中国中西医结合第十九次全国消化病学术会议暨国家级中西医结合消化疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年

3 顾萱;;肝硬化患者自体骨髓干细胞移植护理总结体会[A];2013年河南省腹膜透析及肾病血液净化护理新进展培训班论文集[C];2013年

中国博士学位论文全文数据库 前9条

1 狄军艳;肝干细胞在损伤后肝再生中的作用及其对肝癌细胞的作用研究[D];第二军医大学;2011年

2 张小进;大鼠门脉系统不同血供对肝再生的影响[D];福建医科大学;2011年

3 史冀华;大鼠肝脏部分切除术后肝脏再生及微小肝癌复发的实验研究及其干预策略[D];郑州大学;2010年

4 刘迎娣;骨髓间充质干细胞移植治疗对乙酰氨基酚致肝损伤的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年

5 郑和鸣;逆转录病毒介导人白介素-2基因转染肝干细胞的实验研究[D];浙江大学;2007年

6 杨立明;间充质干细胞移植治疗急慢性肝损伤的实验研究[D];吉林大学;2009年

7 欧阳竞锋;红景天苷诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞以及治疗免疫性肝纤维化的体外、体内实验研究[D];浙江大学;2009年

8 李铸;受体来源转染pBLAST2-hHGF质粒肝卵圆细胞对大鼠移植肝的影响[D];昆明医学院;2010年

9 许惠仙;草苁蓉环烯醚萜苷对大鼠肝脏癌前病变保护机制的实验研究[D];延边大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 穆东;逐级急性肝损伤大鼠血清TNF-α、IL-6和肝组织HSP70表达变化及其意义[D];泸州医学院;2011年

2 吕佳;缺血损伤时骨髓间充质干细胞在种间归巢能力的实验研究[D];昆明医学院;2011年

3 董芳;Ad-GFP-NICD转染对人脐带间充质干细胞促动脉形成潜能影响[D];兰州大学;2011年

4 吴均政;门静脉动脉化及腔门静脉转位术对大鼠肝切除后再生的实验研究[D];福建医科大学;2011年

5 伍成松;不同途径移植骨髓间充质干细胞治疗肝硬化及相关机制研究[D];中南大学;2011年

6 董娟娟;骨形态发生蛋白-4对大鼠肝源性肝干细胞增殖与分化的影响[D];中南大学;2011年

7 张明星;经门静脉灌注阿苯达唑纳米微球治疗肝泡状棘球蚴病的实验研究[D];新疆医科大学;2011年

8 李长珠;骨髓来源细胞参与肝脏损伤后修复的作用及其机制的实验研究[D];第三军医大学;2011年

9 杨玲玲;大鼠同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝衰竭的实验研究[D];南昌大学;2011年

10 张超凤;同种异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠慢性阻塞性肺疾病[D];南方医科大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 苏娟,姚玉成,王忠华,王新民,马大烈,余宏宇,熊俊,訾晓渊,赵书民,胡以平;干细胞样肝原始细胞的分离和鉴定[J];癌变.畸变.突变;2000年04期

2 唐晓鹏,郑宣鹤,杨旭;脐血输注合并血浆置换治疗慢性重型肝炎的疗效初探[J];湖南医科大学学报;2002年04期

3 郑宣鹤，唐晓鹏，陈军，龚国忠，杨旭，吴桐春;脐血与成人鲜血治疗重型肝炎的疗效比较[J];湖南医科大学学报;1996年06期

4 蒋吉英,李爱冬,杨淑霞,洪华容,宋红瑞,梅妍,周鸿鹰,羊惠君;HNF4α和HNF6 mRNA在小鼠肝发育过程中的表达[J];四川大学学报(医学版);2005年04期

5 苏娟,姚玉成,余宏宇,朱海英,王新民,王忠华,胡以平;肝干细胞在小鼠脾脏中集落样生长[J];科学通报;2001年19期

6 任红英;赵钦军;刘拥军;卢士红;李妍涵;韩忠朝;;脐带间充质干细胞体外诱导分化为肝细胞样细胞的研究[J];山东医药;2008年30期

7 吕毅,潘承恩,孟令忠,刘学民;SD大鼠肝脏及附属管道的应用解剖[J];西安医科大学学报(中文版);1998年01期

8 郭志兵,黄洪莲,刁志宏,王小宁;逆转录病毒载体介导的GFP基因在四种细胞株中的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年04期

9 张刚庆;方驰华;;干细胞研究的问题与对策[J];世界华人消化杂志;2003年12期

10 张刚庆,方驰华,池达智;大鼠骨髓间充质干细胞原代培养换液频度与细胞增生的关系[J];世界华人消化杂志;2004年08期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 黄汉英;黎建焯;余四才;黄有文;;胎肝输注治疗血液病14例[J];广西医学;1986年06期

2 陈令松;;胎肝在成羊体内产生促红细胞生成素[J];国外医学(内科学分册);1988年09期

3 谢静;胎肝和胸腺细胞治疗血液病176例的护理[J];护士进修杂志;1989年01期

4 袁海平,王少华;人胎肝超氧化物歧化酶的研究[J];生物化学杂志;1991年02期

5 卢经民,张恩荣,张以华,刘桂兰;胎肝、脾、胸腺细胞混合液治疗中、晚期癌瘤33例临床观察[J];新医学;1992年08期

6 冯芝芬;田爱兰;胡合社;杨柳;;胎肝悬液治疗格林—巴利综合征12例[J];临床医学;1993年06期

7 赵军，秦兆寅，李笃山，纪宗正，苏清华，黎一鸣;胎肝的解剖造影及移植应用价值[J];西安医科大学学报(中文版);1994年03期

8 刘恒兴,申彪,任同明,范锡印,李秀玲,马建军,王庆志;胎肝血管的解剖学观测[J];新乡医学院学报;1998年01期

9 张泳;刘学红;徐文娟;赵仲生;;人胎肝组织制作蜡块脱水时间的探讨[J];现代生物医学进展;2008年03期

10 赵英豪,吴东初,贺阿南;胎肝细胞输注治疗血液疾病3例报告[J];江苏医药;1987年02期

中国重要会议论文全文数据库 前7条

1 贺福初;;人胎肝蛋白质组及其与转录组的对接[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

2 姜颖;王京兰;程刚;钱小红;贺福初;;人胎肝磷酸化蛋白质表达谱的构建[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年

3 吴北燕;黄绍良;陈惠芹;张绪超;魏菁;;人胎肝造血期胎肝间充质干细胞的分离、培养及生物学特性研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

4 吴北燕;黄绍良;陈惠芹;张绪超;魏菁;;人胎肝造血期胎肝间充质干细胞的分离、培养及生物学特性研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

5 肖菲颉;姜树晶;那晓东;;LY294002可抑制VEGF和PLGF对胎肝造血细胞的调控作用[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

6 马丽霞;黄艳红;王绮如;;人卵黄囊造血的初步研究[A];湖南省生理科学会新世纪学术年会论文摘要汇编[C];2002年

7 孙士鹏;刘贵建;;促红细胞生成素的生物学研究进展[A];第一次全国中西医结合检验医学学术会议暨中国中西医结合学会检验医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2014年

中国重要报纸全文数据库 前2条

1 吴志军;[N];科技日报;2006年

2 王雪飞 吴志军;[N];健康报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 陈廷贵;22周孕龄人胎肝转录组及SARS-CoV（BJ-01）基因组的生物信息学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

2 张俊杰;胎肝中特异表达基因的克隆[D];第四军医大学;1998年

3 瞿祥虎;人源重要功能新基因的克隆、表征与功能研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2001年

中国硕士学位论文全文数据库 前4条

1 白磊;胎肝血管的解剖学观测[D];新疆医科大学;2007年

2 党立力;Tg737基因在胎肝干细胞分化过程中的作用及机制研究[D];第四军医大学;2014年

3 张程;孕期母体接触细菌脂多糖上调小鼠胎盘和胎肝血红素氧化酶-1表达[D];安徽医科大学;2008年

4 刘广欣;胎肝干细胞治疗不同类型F344大鼠急性肝衰竭的实验研究及大鼠门静脉分支残端置管模型构建[D];第四军医大学;2014年

  本文关键词：胎肝干细胞治疗不同类型F344大鼠急性肝衰竭的实验研究及大鼠门静脉分支残端置管模型构建，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：149519