小鼠脓毒症早期B细胞表型和功能相关分子的变化趋势

发布时间：2018-02-24 20:14

  本文关键词： 脓毒症 B1细胞 边缘区B细胞 滤泡B细胞 记忆性B细胞　出处：《第二军医大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：【研究目的】 本实验拟研究脓毒症小鼠外周血、脾脏、腹腔中的B淋巴细胞表型、共刺激分子的表达以及分泌功能的变化，初步阐明脓毒症时B淋巴细胞是否发生功能异常。 【研究方法】 1、通过CLP法制作脓毒症小鼠模型。将24只C57BL/6小鼠分为假手术组（sham, n=6）和CLP组（CLP，n=18），后者再分为CLP6h组（n=6）、CLP24h组（n=6）和CLP48h组（n=6）。手术后6h、24h与48h时，流式细胞术检测外周血、脾脏和腹腔中CD19+CD5+B细胞、CD19+CD21+B细胞、CD19+CD23+B细胞和CD19+CD27+B细胞的百分比变化；以及B淋巴细胞上CD40、CD69、CD80、CD86百分比的变化和mIgM、mIgD平均荧光强度的变化。 2、通过CLP法制作脓毒症小鼠模型。将24只C57BL/6小鼠分为假手术组（sham, n=6）和CLP组（CLP，n=18），后者再分为CLP6h组（n=6）、CLP24h组（n=6）和CLP48h组（n=6）。手术后6h、24h、48h时，酶联免疫吸附试验检测血浆和（或）腹腔中GM-CSF、IL-10、IgM的水平。 【结果】 1、脓毒症小鼠外周血中，CD19+CD5+B细胞无变化；CD19+CD21+B细胞和CD19+CD23+B细胞CLP术后减少，48h降至最低（p0.01）；CD19+CD27+B细胞在CLP术后6h升高（p0.05），48h显著降低（p0.05）。功能性相关分子：CD40表达在CLP术后明显升高，6h达到高峰（p0.05）；CD69仅在CLP24h有所升高（p0.01）；CD80在CLP术后均显著升高，但48h较6h轻微降低（p0.01）；CD86于CLP术后6h升高，24h降低且低于正常，48h又恢复至正常水平（p0.01）。B细胞上mIgM的表达在CLP术后6h开始升高，24h降低，48h恢复至正常水平（p0.01）； mIgD的平均荧光强度在CLP术后24h降低，48h恢复正常水平（p0.01）。 2、脓毒症小鼠脾脏中，CD19+CD5+B细胞和CD19+CD21+B细胞CLP术后无变化；CD19+CD23+B细胞CLP术后24h和48h降低（p0.01）；CD19+CD27+B细胞在CLP术后48h升高（p0.01）。功能相关分子：CD40和mIgM的表达无改变；CD69在CLP术后6h开始升高，在24h达到高峰，48h时明显降低但仍高于假手术组和6h组（p0.01）；CD80在CLP术后24h开始升高（p0.01），48h达到高峰（p0.01）；CD86于手术后24h升高，48h略微下降但仍高于比其他组（p0.01）。mIgD在术后48h升高（p0.01）。 3、脓毒症小鼠腹腔中，CD19+CD5+B细胞在6h和24h减少（p0.05），48h后升高恢复至正常水平（p0.01）。功能相关分子： CD40在CLP术后无变化；CD69在CLP术后持续升高（p0.01）；CD80在CLP术后24h开始升高（p0.01）；CD86于手术后6h和24h明显升高（p0.05），48h下降（p0.01）且显著低于其他组（p0.01）。mIgM和mIgD在CLP术后6h开始降低，分别于24h和48h降至最低水平（p0.01）。 4、小鼠血浆中IgM表达在CLP术后48h降低（p0.05）。腹腔中IgM表达在CLP术后6h升高（p0.01），48h达到最高水平（p0.01）；腹腔中GM-CSF和IL-10水平在CLP术后升高，24小时达到最高峰，而在48h降低恢复至正常水平（p0.01）。 【结论】 脓毒症时受影响的B淋巴细胞可能主要是CD19+CD23+B细胞，可能提示参与获得性免疫反应的B细胞功能受损；腹腔中CD19+CD5+B1细胞一过性降低，可能与抵抗感染所致数量丢失有关，但B1细胞似乎可通过自我更新恢复正常。 脓毒症时各部位B细胞均处于活化状态，共刺激分子CD40、CD80和CD86在CLP术后早期均上调，但之后均有不同程度降低，甚至低于正常水平，，进一步提示脓毒症时B细胞获得性免疫反应能力降低。
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【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R459.7

【参考文献】

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1 李轶男;周立新;方滨;毛克江;温伟标;誉铁鸥;邹毅成;黎文研;黎昌;;重度脓毒症患者单核细胞HLA-DR表达与器官功能不全的相关性研究[J];南方医科大学学报;2009年07期

本文编号：1531562