宫血间充质干细胞来源的外泌体治疗急性肝衰竭作用研究

发布时间：2018-02-26 02:12

  本文关键词： 宫血干细胞 外泌体 急性肝衰竭 诱导分化　出处：《浙江大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：宫血干细胞(Menstrual blood derived mesenchymal stem cell,MenSCs)是一种新型来源的成体间充质干细胞,它来源于女性的月宫血,拥有获得方便,安全无伦理问题等优点。外泌体(exosomes)是一类可由不同细胞产生的直径在30-100nm之间的双层脂质的囊胞,其中包含有蛋白质和RNA等物质。本研究重点阐述MenSCs来源的exosomes在体内和体外对D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭的治疗效果,以及小鼠肝脏细胞AML12条件培养上清(AML12-CM)体外诱导MenSCs分化为肝脏样细胞的研究。首先,我们在体内和体外证实了 MenSCs来源的exosomes对D-GalN/LP诱导的急性肝衰竭的治疗效果。在成功提取MenSCs来源的exosomes后,鉴定其表达exosomes相关标记蛋白如CD63和TSG101。在体内和体外示踪实验中,exosomes经染色后,可以在小鼠模型肝脏内或共培养的肝脏细胞中观察到。MenSCs和MenSCs来源的exosomes的抗体芯片结果显示:exosomes含有较高含量的ICAM-1,angiopoietin-2,Axl,angiogenin,IGFBP-6,osteoprotegerin,IL-6 和 IL-8 等蛋白。在细胞实验中,MenSCs来源的exosomes可以抑制由D-GalN/LPS诱导的小鼠肝细胞系AML12的凋亡。体内实验结果显示MenSCs来源的exosomes注射到D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭小鼠模型体内后,可以显著抑制小鼠血清中ALT和AST的升高、抑制炎症因子(IL-6,IL-1β和TNF-a)的升高,并抑制肝脏细胞的凋亡。我们推测并证实其机制是通过抑制凋亡因子(caspase-3)的表达,以及阻止小鼠肝脏中炎症细胞(NK细胞和CD11b+细胞)在肝脏中聚集而发挥作用。其次,我们研究了肝细胞系AML12细胞培养上清体外诱导MenSCs分化为肝细胞样细胞。诱导分化21天后,细胞逐渐发生胞质浓缩形成上皮样细胞,表达ALB、AFP、CK-18、CK-19、HNF-4a和CAT-1等肝细胞的特异性基因,以及表达ALB和AFP肝细胞特异性蛋白。功能实验显示诱导分化后的肝细胞样细胞具有糖原储存,ICG摄取和分泌以及尿素合成能力。综上,我们通过D-GalN/LPS诱导的急性肝衰竭小鼠模型和体外共培养实验初步证实了 MenSCs来源的exosomes可以用于治疗急性肝衰竭。此外,MenSCs在条件培养诱导下可以分化为具有成熟肝细胞功能的肝细胞样细胞,可用于急性肝衰竭缓解期的后续治疗。总而言之,MenSCs和其来源的exosomes可以作为一种治疗急性肝衰竭的可选性方案,为临床应用提高理论依据。
[Abstract]:In vivo and in vitro tracer experiments , exosomes derived from MenSCs were cultured in vivo and in vitro . The results showed that exosomes derived from MenSCs were induced by D - GalN / LPS . The results showed that exosomes derived from MenSCs could inhibit the proliferation of human liver cells induced by D - GalN / LPS . and the theoretical basis is improved for clinical application .

【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R575.3

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本文编号：1536092