磷脂酰肌醇3激酶信号通路在天麻素抑制脂多糖诱导H9c2心肌细胞炎症反应中的

发布时间：2016-11-07 13:35

  本文关键词：磷脂酰肌醇3激酶信号通路在天麻素抑制脂多糖诱导H9c2心肌细胞炎症反应中的保护性机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

《昆明医科大学》 2013年

磷脂酰肌醇3激酶信号通路在天麻素抑制脂多糖诱导H9c2心肌细胞炎症反应中的保护性机制研究

杨萍  

【摘要】：[目的]通过构建脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的大鼠H9c2心肌细胞为炎症模型,从细胞和分子层面探讨天麻素对H9c2心肌细胞炎症的抑制作用及其信号机制。 [方法]体外培养的大鼠H9c2心肌细胞随机分为空白对照组、LPS (1μg/ml,30min-12h)处理组、不同浓度的天麻素(5、10和20μM,1h)+LPS处理组、不同浓度的天麻素+LPS+wortmannin (1μM)共同处理组和阳性对照组。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测天麻素、LPS以及wortmannin对H9C2心肌细胞的活力影响；采用免疫荧光双标记检测方法(double-immunofluorescence labeling assay)在荧光显微镜下观察细胞内诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor, TNF-α)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)蛋白水平的变化；应用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)检测iNOS、COX-2、TNF-α和IL-6的mRNA水平的变化；采用蛋白质印迹分析方法(western blotting)检测蛋白激酶B (protein kinase B, Akt)、抑制剂κB (inhibitor κB,IκB)、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAPKs)家族的细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2, ERK1/2)、 c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinases, JNK)和p38促分裂原活化蛋白激酶(p38mitogen-activated protein kinases, p38MAPK)等细胞信号通路蛋白的表达及其变化规律：采用凝胶迁移或电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)的蛋白表达水平。 [结果]H9c2心肌细胞以1×106个/ml浓度接种于6孔板中,当密度均匀生长至80%时,使用MTT检测H9c2心肌细胞活力影响,结果显示：经天麻素(5、10和20μM)、 LPS (1μg/ml)和wortmannin (1μM)分别处理或共同处理12h后该细胞活性均无明显影响；加入P13-K抑制剂wortmannin (1μM)1h后,再加入天麻素和LPS处理细胞30min-3h,采用免疫荧光双标记检测方法、RT-PCR、 EMSA以及western blotting分析,得到结果：①不同浓度的天麻素明显激活H9c2心肌细胞PI3-K/Akt的磷酸化表达；②不同浓度的天麻素通过PI3-K/Akt信号通路在转录水平和翻译水平明显抑制LPS诱导的H9c2心肌细胞促炎性蛋白酶iNOS和COX-2的表达；③不同浓度的天麻素激活PI3-K/Akt信号通路下调LPS诱导的H9C2心肌细胞促炎性细胞因子TNF-a和IL-6在mRNA水平和蛋白水平的表达；④天麻素通过PI3-K/Akt信号通路抑制LPS诱导的H9c2心肌细胞NF-κB的激活；⑤天麻素激活PI3-K/Akt信号通路抑制LPS诱导的H9c2心肌细胞IκB、 ERK1/2、 JNK和p38MAPK的磷酸化。 [结论]①5-20gM的天麻素、1μg/ml的LPS和1μM wortmannin的对细胞活性没有影响；②天麻素通过PI3-K/Akt信号通路抑制MAPKs的磷酸化来调控LPS诱导的H9c2心肌细胞内促炎性蛋白酶以及促炎性细胞因子的释放;③天麻素激活PI3-K/Akt信号通路抑制IκB的磷酸化和NF-κB的活化,从而发挥天麻素下调LPS诱导的H9c2心肌细胞的抗炎作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R459.7
【目录】：

下载全文 更多同类文献

CAJ全文下载

(如何获取全文？ 欢迎：购买知网充值卡、在线充值、在线咨询)

CAJViewer阅读器支持CAJ、PDF文件格式

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 付颖;王耀光;李永春;;Ⅱ型糖尿病大鼠运动后骨骼肌IRS-2、GLUT4含量及IRS-2磷酸化变化的时间特征[J];首都体育学院学报;2011年04期

2 文重远,李庚山,刘永明,王腾,吴勇,陈小琳;游离脂肪酸对2型糖尿病心肌能量底物代谢及心功能的影响[J];临床心血管病杂志;2005年07期

3 苏会玲;汤桂梅;范洪君;苏红慧;陈坤;;HGF/SF-MET通路的基本原理[J];河北医药;2013年21期

4 薛伟善;;不同运动时间对2型糖尿病大鼠骨骼肌Glut-4含量变化的研究[J];沈阳体育学院学报;2012年04期

5 薛红丽;张曾;王文健;陈伟华;应健;;益气增敏方对2型糖尿病大鼠骨骼肌组织葡萄糖转运蛋白4表达的影响[J];中西医结合学报;2011年10期

6 李永春;;糖尿病大鼠骨骼肌细胞膜葡葡糖转运蛋白4含量在不同强度运动状态下的变化[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年20期

7 李春蕊;张晶;刘文励;张木勋;;罗格列酮对实验性2型糖尿病合并高脂血症大鼠骨骼肌组织IRS-1及GLUT4表达的调节[J];中国病理生理杂志;2007年05期

8 陈频;徐向进;史道华;;复方丹参滴丸对胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢的影响[J];中成药;2008年04期

9 宋春宇,毕会民;葛根素对大鼠胰岛素刺激下骨骼肌细胞膜GLUT4蛋白含量的影响[J];中国中药杂志;2004年02期

10 张玲;李大伟;夏作理;李青;;钒对心血管系统功能的影响及其机理[J];中国微循环;2006年06期

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 南雪梅;奶山羊乳腺物质代谢研究[D];东北农业大学;2010年

2 边姝;嘌呤信号在结肠癌中的杀伤机制研究[D];山东大学;2013年

3 泰文娇;番荔枝酰胺衍生物FLZ的神经保护作用机制研究[D];北京协和医学院;2013年

4 王逵;SDF-1α/CXCR4轴对心肌干细胞迁移及归巢修复心肌的影响[D];第三军医大学;2013年

5 张昊;小鼠心肌干细胞的体外分离培养、分选与鉴定及他汀对心肌干细胞存活的研究[D];北京协和医学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 文小平;咖伦宾对实验性2型糖尿病大鼠降糖作用及其机制研究[D];华中科技大学;2009年

2 宋春宇;葛根素对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4含量的影响[D];武汉大学;2004年

3 陈小琳;罗格列酮对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌细胞膜GLUT4表达的影响[D];武汉大学;2004年

4 李艳蓉;新型钒配合物双（α-呋喃甲酸）氧钒的降糖作用及机理分析[D];昆明医学院;2005年

5 李为为;渐进性训练对糖尿病大鼠TNF-α和SOD含量的影响[D];华东师范大学;2006年

6 周晨慧;PTEN基因SNP及单体型在西南地区汉族人群的分布及与2型糖尿病的关系[D];重庆医科大学;2006年

7 陈频;复方丹参滴丸对胰岛素抵抗状态糖脂代谢的作用及其机制研究[D];福建医科大学;2007年

8 王超然;新型钒化合物V-SIH或V-NIH降低1型糖尿病大鼠血糖及其细胞毒性的研究[D];北京中医药大学;2009年

9 毛刘锋;内质网应激在2型糖尿病动脉粥样硬化小鼠脂肪肝形成中的机制探讨[D];山东师范大学;2009年

10 汪晓芬;大鼠追赶生长早期脂肪组织和骨骼肌葡萄糖代谢差异及其机制的研究[D];华中科技大学;2008年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 薛顺国;徐春杰;;合成天麻素片含量测定方法的改进[J];中国医药工业杂志;1985年04期

2 陆光伟;邹元杰;莫启忠;;~3H-天麻素在大鼠体内的吸收、分布、代谢和排泄[J];药学学报;1985年03期

3 陈彬,王炳南,李铜铃,池西旆,罗蓉;天麻素注射液的稳定性研究[J];四川大学学报(医学版);1986年03期

4 陆光伟;;不同给药时辰对[~3H]天麻素大鼠体内过程的影响[J];四川生理科学杂志;1989年03期

5 罗燕燕，逯梅，，朱青，李光慧;HPLC测定脑血舒通丸中天麻素的含量[J];中国药学杂志;1994年11期

6 王正荣,罗红淋,肖静,郭惠玲,薛振南;天麻素对动脉血管顺应性以及血流动力学的影响[J];生物医学工程学杂志;1994年03期

7 聂浩鸿;全天麻胶囊中天麻素的高效液相色谱测定[J];贵阳中医学院学报;1998年04期

8 戴均贵,鲁丹丹,崔亚君,郭洪祝,郑俊华,果德安;桔梗悬浮培养对细胞天麻素的生物转化[J];药学学报;2001年12期

9 徐金章,杨水新;天麻饮片中天麻素的含量测定方法的研究[J];中成药;2001年11期

10 谢笑天,郑萍,徐树光,陈云建;HPLC法测定天眩清注射液中天麻素的含量[J];中国新药杂志;2002年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 秦玉明;王大为;杨世伟;曹黎明;赵乃铮;王凤鸣;钱建华;龚晓平;周凯;胡宝珍;;经皮球囊肺动脉瓣成形术对小儿心肌细胞的影响[A];2006（第三届）江浙沪儿科学术会议暨浙江省儿科学术年会论文汇编[C];2006年

2 乔国芬;吴玲;初文峰;吕延杰;杨宝峰;;血小板活化因子诱导H9c2心肌细胞凋亡作用及其机制[A];第六届海峡两岸心血管科学研讨会论文摘要集[C];2007年

3 朱丹;黄秀兰;;人参皂苷Rg1保护心肌细胞免于缺氧-复养损伤涉及PKCε-activated ERK1/2径路[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年

4 裴建明;王跃民;马恒;黄德明;;不同时间低氧后心肌细胞钙瞬变的变化[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年

5 林国生;蔡军;江洪;杨波;蒋学俊;王腾;代治国;范国华;余奇劲;;胚胎心肌细胞移植治疗缓慢型心律失常的实验研究[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

6 周苏宁;邵建华;;缺氧复氧心肌细胞NF-κB活化调控iNOS基因表达及NO释放[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年

7 赵军;顾振纶;杨吉成;盛伟华;郑世营;;缺氧对心肌细胞DNA链损伤的体外实验研究[A];中华医学会第七次全国胸心血管外科学术会议暨2007中华医学会胸心血管外科青年医师论坛论文集心血管外科分册[C];2007年

8 张玉霞;刘铭球;喻伦银;刁路明;唐志佼;夏东;王敏;;血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞、成纤维细胞增殖和肥大中cyclinD_2和p16基因转录及蛋白表达变化[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展（上册）[C];2001年

9 梁贵友;李剑;徐刚;刘达兴;宋永祥;;PI3K在犬体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗发生机制中的作用[A];贵州省医学会胸心血管外科分会2010年学术年会论文集[C];2010年

10 陈炜;张雷;尹青;赵昱;赵春芳;;诱导胚胎源性干细胞分化为心肌细胞的实验研究[A];2007年中国解剖学会第十届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 编译 晓鱼;[N];医药经济报;2009年

2 记者 郑晓春;[N];科技日报;2009年

3 杨洋;[N];卫生与生活报;2003年

4 刘霞;[N];科技日报;2010年

5 记者 张晔;[N];科技日报;2011年

6 艾平 编译;[N];大众科技报;2000年

7 吴伟农;[N];医药经济报;2001年

8 ;[N];中国保险报;2003年

9 胡友珍;[N];医药养生保健报;2005年

10 周鸿彩;[N];云南科技报;2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 孙宇扬;双参宁心胶囊干预心肌缺血的分子机制研究[D];中国中医科学院;2006年

2 马丽娟;大豆异黄酮对心肌的保护作用及其机制研究[D];吉林大学;2006年

3 储全根;加味桃核承气汤及其不同提取物对糖尿病大鼠心肌和主动脉病变的影响[D];广州中医药大学;2005年

4 孙彦洵;Smad5基因在小鼠胚胎干细胞增殖、分化及凋亡中的功能与机制[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

5 秦川;EPO预处理在心肌缺氧复氧损伤中的保护作用及其NF-κB信号机制的研究[D];第三军医大学;2005年

6 李曦铭;基因重组hVEGF165腺相关病毒的构建及其在间充质干细胞和心肌细胞中的表达[D];天津医科大学;2006年

7 邹安若;心肌萎缩对大鼠心肌移植细胞钾通道的影响[D];华中科技大学;2004年

8 韩冬云;钙调蛋白对豚鼠心室肌细胞Cav1.2钙通道的剂量依赖性和钙依赖性作用[D];中国医科大学;2007年

9 张郁青;自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的基础及临床研究[D];南京医科大学;2006年

10 陈艳明;脓毒症时一氧化氮在肺脏和心脏中的损伤作用及其机制[D];中国人民解放军军医进修学院;2007年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 杨萍;磷脂酰肌醇3激酶信号通路在天麻素抑制脂多糖诱导H9c2心肌细胞炎症反应中的保护性机制研究[D];昆明医科大学;2013年

2 朱炳豹;过表达CrkL对H9C2心肌细胞株生物学行为的影响[D];重庆医科大学;2011年

3 刘井波;镰刀菌毒素丁烯酸内酯对心肌的毒性作用机制[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年

4 宋明;白藜芦醇干预缺血后处理对H9c2（2-1）心肌细胞坏死率及p38MAPK/PPARγ途径的研究[D];山西医科大学;2010年

5 李晓伟;Intermedin对缺氧复氧所致H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用[D];山西医科大学;2012年

6 姜雪松;新生SD大鼠心肌细胞培养方法的研究[D];昆明医学院;2004年

7 郭军;细胞因子预处理对骨髓间充质干细胞增殖分化的影响[D];武汉大学;2005年

8 李建荣;丙泊酚对肿瘤坏死因子诱导的心肌细胞凋亡的影响[D];山西医科大学;2007年

9 王澎;血管紧张素Ⅱ AT_1受体自身抗体对大鼠心室肌细胞动作电位和心肌变力性的影响[D];山西医科大学;2007年

10 李卫东;体外模拟心肌微环境下胚胎干细胞向心肌样细胞分化的实验研究[D];重庆医科大学;2008年

  本文关键词：磷脂酰肌醇3激酶信号通路在天麻素抑制脂多糖诱导H9c2心肌细胞炎症反应中的保护性机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：166866