钙蛋白酶在烧冲复合伤心肌损伤中的作用和机制研究

发布时间：2018-03-31 09:30

  本文选题：烧冲复合伤　切入点：冲击伤　出处：《中国人民解放军医学院》2017年博士论文

【摘要】：目的:烧冲复合伤是常见的致死性损伤类型之一。导致心肺功能、免疫调节、凝血系统的损伤程度都较单一烧伤或单一冲击伤更严重,特别是循环系统变化尤为显著。因此,心肌损伤的治疗对机体整体救治影响深远。最近的研究表明钙蛋白酶活化后能诱导心肌细胞凋亡,引起心肌收缩功能下降。为阐明烧冲复合伤心肌损伤的机制,为临床治疗提供理论依据和治疗靶点,本研究拟探讨:(1)烧冲复合伤大鼠心肌损伤及钙蛋白酶变化规律的研究;(2)钙蛋白酶在烧冲复合伤心肌损伤中作用,探讨烧冲复合伤心肌损伤的发病机制,为其临床救治寻找新的方法;(3)果糖二磷酸钠对烧冲复合伤大鼠心肌损伤的治疗作用及机制。方法:实验分为三部分。第一部分选取雄性SD大鼠,随化分为:对照组、烧伤组、冲击伤组、烧冲复合伤组。第二部分使用随机数字表法将大鼠分为烧冲复合伤组、MDL28170抑制剂组和Ac-DEVD-Cho抑制剂组。(细胞实验)H9C2细胞分为对照组、烧冲复合伤组、烧冲复合伤组+MDL2817组、烧冲复合伤+Ac-DEVD-Cho抑制剂组。calpain基因干扰性RNA(siRNA)将H9C2分为(1)对照组(2)实验组(BB) (3)阴性scramble+BB组(4)阳性siRNA+BB组;第三部分雄性SD大鼠随机分为正常对照组、烧冲复合伤组和果糖二磷酸钠组。伤后6h、24h、48h、72h4个观察点,采集腹主动脉血和心肌标本。测定左心室射血分数、左心室短轴缩短指数;心肌组织HE染色;透射电镜观察心肌组织超微结构变化;血清CTnI、CK-MB检测;Tunel染色检测心肌组织细胞凋亡,实时定量荧光PCR检测calpain表达水平、calpastatin表达水平;荧光定量检测钙蛋白酶活性。Western blot免疫印迹分析心肌中calpain、细胞色素c、活化Bid、葡萄糖调节蛋白78、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白、B淋巴细胞瘤-2基因、Bcl-2相关X蛋白和calpastatin的表达;电子探针X射线显微分析法检测心肌细胞胞浆内Ca2+含量。结果:第一部分:烧冲复合伤大鼠射血分数下降、心肌酶谱,肌钙蛋白、凋亡指数增高,GRP78、CHOP、Bax、Cytc、Bid蛋白表达和caspase-3,12活性及calapin蛋白表达及mRNA水平升高,calpastatin mRNA和calpastatin蛋白表达与Bcl-2蛋白降低,心肌细胞浆Ca2+升高,与对照组比较差异显著。第二部分:烧冲复合伤组大鼠的心功能下降,CTnI、CK-MB、Grp78、CHOP、Bax、Fas、Cytc、Bid蛋白表达、caspase-3, 12活性和伤后凋亡指数、钙蛋白酶活性升高,与同时间点MDL28170抑制剂组、Ac-DEVD-Cho抑制剂组相比,有显著性差异,H9C2细胞胞浆中Ca2+与钙蛋白酶变化趋势一致。calpain基因干扰后,H9C2细胞calpain蛋白表达降低。RNA干扰组细胞荧光强度相对较弱。第三部分:果糖二磷酸钠组大鼠伤后心功能缓慢下降,cTnI、CK-MB变化趋势与烧冲复合伤组一致,GRP78、CHOP、calapin蛋白表达水平和细胞浆中Ca2+低于烧冲复合伤组,有显著性差异。结论:(1)烧冲复合伤后钙蛋白酶表达升高、活性增强是导致大鼠心功能心功能降低重要原因之一;(2)烧冲复合伤后引起内质网应激导致心肌细胞内Ca2+超载使钙蛋白酶活化,活化的钙蛋白酶过表达促进心肌细胞凋亡,细胞凋亡主要由于线粒体外膜通透性的增加、促凋亡物质的释放、凋亡执行分子caspase-3活化引起。(3)钙蛋白酶抑制剂(MDL28170)和果糖二磷酸钠能减轻钙蛋白酶表达升高、活性增强引起得心功能降低,为指导临床治疗重度烧冲复合伤心功能降低提供理论依据。
[Abstract]:Objective: burn is one of the common lethal injury type. Lead to heart and lung function, immune regulation, the damage degree of the coagulation system compared with single or single burn blast injury is more serious, especially the changes of circulatory system is particularly significant. Therefore, the treatment of myocardial injury has a great effect on the whole body treatment. Recent studies show that after the activation of calpain can induce the apoptosis of myocardial cells, myocardial contraction function decreased. To elucidate the mechanism of burn blast combined injury of myocardium, and provide a theoretical basis and therapeutic targets for clinical treatment, this study aims to investigate: (1) study on burn rat myocardial injury and calpain changes; (2) calpain in burn-blast composite myocardium injury, to investigate the pathogenesis of combined burn blast injury myocardium, to find a new method for the clinical treatment; (3) two fructose sodium phosphate on myocardial injury in rats with burn shock 鎹熶激鐨勬不鐤椾綔鐢ㄥ強鏈哄埗.鏂规硶:瀹為獙鍒嗕负涓夐儴鍒，

本文编号：1690142