肠淋巴液引流对失血性休克大鼠内质网应激应激的影响

发布时间：2018-04-10 01:37

  本文选题：失血性休克　切入点：内质网应激　出处：《河北北方学院》2013年硕士论文

【摘要】：重症失血性休克引起机体组织器官的缺血、缺氧,进一步引起组织细胞的内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS),导致细胞结构损伤或凋亡,成为患者器官功能障碍、衰竭乃至死亡的重要因素。近年来研究表明,危重状态下的肠淋巴液回流至体循环成为远隔器官肺、肝、心、肾等重要器官损伤的重要原因；以肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流的手段阻断肠淋巴液回流均可减轻各组织器官的炎症反应、自由基损伤,改善能量代谢,对于重症休克的防治具有积极意义。但减少肠淋巴液回流减轻器官损伤的机制是否与降低组织细胞的内质网应激有关,尚不清楚。 为此,本研究采用失血性休克模型,观察休克肠淋巴液引流对休克大鼠肺、肝、肾、心肌组织细胞内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein78, GRP78)、钙网蛋白(calreticulin, CRT)的影响,进一步观察对ERS引起细胞凋亡途径的启动分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase12, Caspase-12)以及细胞凋亡的影响,探讨肠淋巴液引流对失血性休克大鼠组织细胞内质网应激的作用。 首先,18只Wistar雄性大鼠随机均分为：假手术组、休克组及休克肠淋巴液引流组(休克+引流组)。大鼠经戊巴比妥钠全身麻醉后,行股部手术,右股静脉注射肝素钠全身抗凝,右股动脉插管连接生物信号采集系统,连续监测平均动脉血压(mean artery pressure, MAP);左股侧动脉插管后连接注射器固定于抽注机上备放血用；腹部手术,剥离肠系膜淋巴管。待所有手术完成、稳定30min后,休克组、休克+引流组大鼠经左股动脉匀速放血,10min内将MAP降至40mmHg,复制失血性休克模型。维持低血压60min后,将放出的全血与林格氏液按1：1混匀,经右侧股静脉输液复苏,30mmin完成；观察至输液结束后3h。休克+引流组在输液结束后,行肠淋巴管插管,按我室常规方法引流休克肠淋巴液至休克3h。假手术组进行相同的手术操作,但不放血、不输液。休克组及休克+引流组大鼠在液体复苏后3h、假手术组于相应时间点,留取肺、肝、心肌、肾组织,部分组织制备10%组织匀浆,ELISA法检测GRP78、CRT、CHOP、Caspase-12含量；部分组织制备单细胞悬液,应用流式细胞仪进行细胞周期分析,计算细胞增殖指数(proliferation index, PI)；部分组织应用多聚甲醛固定,制备组织切片,DAPI染色法检测各组织细胞的凋亡率。 结果显示,休克组大鼠肺、肝、肾、心肌组织内质网应激标志分子GRP78、CRT含量均显著高于假手术组；休克+引流组肺、肝、肾、心肌组织GRP78含量以及肺、肝、肾组织CRT含量均显著低于休克组,但肺、肝、心肌组织GRP78、CRT含量仍显著高于假手术组。同时,发现休克组大鼠肺、肝、肾、心肌组织内质网应激引起细胞凋亡途径启动分子CHOP、Caspase-12含量均显著高于假手术组；休克+引流组肺、肝、肾、心肌组织CHOP以及肝、肾组织Caspase-12含量均显著低于休克组,但肺、肝、心肌组织CHOP以及肺、肝组织Caspase-12含量仍显著高于假手术组。 进一步的研究发现,休克组大鼠肝、肾组织的G0/G1期细胞显著高于假手术组,肺、肝、肾组织S期细胞、G2/M期细胞、增殖指数PI均显著低于假手术组,肠淋巴液引流则引起肺、肝、肾组织G0/G1期细胞显著降低、PI显著增高。同时也发现,休克组大鼠肺、肝、肾、心肌组织细胞凋亡率明显高于假手术组,肠淋巴液引流有效地减少了肺、肝、肾、心肌组织的细胞凋亡。 总之,内质网应激是失血性休克后肺、肝、肾、心肌损伤的重要发病学机制之一；肠淋巴液引流可减少失血性休克大鼠多个组织器官内质网应激标志分子GRP78、CRT的含量,进一步减少内质网应激引起细胞凋亡途径启动分子CHOP、Caspase-12的含量,从而改善细胞增殖,减少细胞凋亡。研究结果为以淋巴为靶点进一步应用于危重病的临床防治奠定了实验基础。
[Abstract]:In recent years , it has been shown that the reflux of the intestinal lymph fluid into the circulatory system is an important cause of the injury of vital organs such as lung , liver , heart and kidney .
It is not clear whether the mechanism of reducing the reflux of intestinal lymph fluid to alleviate organ damage is related to the reduction of the endoplasmic reticulum stress of the tissue cells .

In this study , hemorrhagic shock model was used to observe the effects of shock intestinal lymph fluid drainage on the expression of glucose - regulated protein 78 ( GRP78 ) and calreticulin ( CRT ) in the lung , liver , kidney and myocardial tissue cells of shock rats .

棣栧厛,18鍙猈istar闆勬，

本文编号：1729111