体外培养人创面肉芽组织成纤维细胞生物学特性研究

发布时间：2018-05-21 19:01

  本文选题：肉芽组织 + 成纤维细胞　； 参考：《遵义医学院》2013年硕士论文

【摘要】：目的：观察体外培养人创面肉芽组织成纤维细胞的增殖活力、CD分子表型、部分因子及相关蛋白表达和体外诱导分化能力等生物学特性,探讨成纤维细胞在创面愈合早期中的作用,为进一步研究提供研究资料。 方法：成人深度烧伤后14天,整块切取创面肉芽组织,采用机械法和酶消化法相结合分离、培养人创面肉芽组织成纤维细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态及增殖情况,计算原代及第3代细胞倍增时间,绘制原代及第3代细胞生长曲线。应用流式细胞仪检测原代及第3代细胞CD105、CD73、CD90及CD44等间充质干细胞表面标志,CD34、CD45、CD19、CDllb及HLA-DR等造血干细胞表面标志的表达情况。取第3代细胞行免疫细胞化学检测波形蛋白(Vimentin)、角蛋白19(CK19)、CD31和第Ⅷ因子相关抗原(FⅧ)的表达情况。并对第3代细胞进行成脂、成骨及成软骨细胞多向诱导分化能力的鉴定。 结果：原代培养的成纤维细胞呈短梭形、多角形或不规则形；体外培养连续多次传代后细胞形态主要以长梭形为主,排列规则,呈平行状、放射状、旋涡状生长；细胞增殖良好,有明显的对数生长期,体外培养第1-4天,原代及第三代细胞增殖能力无差异(P0.05),从第5天开始第三代比原代细胞增殖能力强(P0.05)。人创面肉芽组织成纤维细胞原代细胞的倍增时间为18.7h,第3代细胞的倍增时间为15.3h。流式细胞仪检测原代及第3代细胞高表达CD105、CD73、CD90及CD44等间充质干细胞表面标志,不表达CD34、CD45、CD19、CDllb及HLA-DR等造血干细胞表面标志,且第3代细胞表达间充质干细胞表面标志比例明显增高。免疫细胞化学检测波形蛋白、内皮细胞标志物CD31阳性表达；不表达第Ⅷ因子相关抗原和角蛋白19。多向诱导分化实验显示可向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞分化,具有多向分化潜能。 结论：1、体外培养人创面肉芽组织成纤维细胞表达间充质干细胞样细胞的CD分子表型,且具有多向分化潜能,该细胞具有间充质干细胞样生物学特性。 2、体外培养人创面肉芽组织成纤维细胞表达内皮细胞部分生物学标志物,创面血管内皮细胞通过内皮向间质转化(EndMT)可能是人创面愈合早期肉芽组织成纤维细胞的来源之一。
[Abstract]:Objective: to observe the biological characteristics of proliferative activity of fibroblasts from human wound granulation tissue in vitro, such as phenotype of CD, expression of some factors and related proteins, and ability of inducing differentiation in vitro. To investigate the role of fibroblasts in early wound healing, and to provide data for further study. Methods: after 14 days of adult deep burn, the granulation tissue of the wound was cut and separated by mechanical method and enzyme digestion method. The fibroblasts of human wound granulation tissue were cultured. The morphology and proliferation of the granulation tissue were observed under inverted phase contrast microscope. The doubling time of primary and third generation cells was calculated and the growth curves of primary and third generation cells were plotted. Flow cytometry was used to detect the expression of surface markers of primary and third generation cells, such as CD105, CD73, CD90 and CD44, on the surface markers of hematopoietic stem cells, such as CD34, CD45, CD19, CDllb and HLA-DR. The expression of vimentin (Vimentinus), keratin 19 (CK19) CD31 and factor 鈪，

本文编号：1920378