TREM-2在脓毒症发生发展中的作用及机制研究

发布时间：2018-05-25 16:41

  本文选题：TREM-2 + 表达水平　； 参考：《浙江大学》2014年博士论文

【摘要】：第一部分TREM-2在脓毒症小鼠中的表达及其与脓毒症发生发展的关系 研究目的：TREM-2是一类主要表达于活化的巨噬细胞、属于免疫球蛋白超家族的细胞表面受体。Ⅱ型细胞因子(如IL-4等)能诱导巨噬细胞TREM-2的表达。TREM-2是包括G+菌、G-菌和酵母菌等在内的病原微生物的吞噬受体,TREM-2及其介导的信号通路能明显减弱巨噬细胞产生与释放促炎介质的能力。因而推测TREM-2可能在脓毒症的感染和免疫炎症调控过程中发挥重要作用。因此,本部分研究通过检测脓毒症小鼠重要脏器／组织巨噬细胞TREM-2的表达水平,分析细胞TREM-2的表达水平和脓毒症发生发展之间的相关性。 研究方法：采用CLP诱导小鼠脓毒症模型,以假手术小鼠作为对照组,于术后Oh、6h、12h、24h、72h、120h、168h取小鼠肝脏、肺脏、脾脏和腹腔灌洗液、外周血等。采用免疫组化法检测肝脏、肺脏和脾脏组织中TREM-2的表达水平,并采用双重免疫荧光标记法对TREM-2的表达进行细胞定位。采用流式细胞术检测腹腔巨噬细胞中TREM-2的表达水平,采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测外周血IL-4、IL-13和IL-10浓度,采用琼脂平板培养法检测腹腔细菌感染程度。 结果：脓毒症小鼠和对照小鼠术后0h各脏器组织均不表达TREM-2。在肝脏、肺脏和脾脏,脓毒症小鼠CLP术后6h TREM-2表达水平开始增强,并于术后72h到达峰值,之后又呈逐渐下降,而对照组小鼠在各时间点均未检测到TREM-2表达。双重免疫荧光标记法证实TREM-2表达于组织巨噬细胞。在腹腔巨噬细胞中,脓毒症小鼠TREM-2的表达变化与其他脏器一致,而对照组小鼠在术后24h TREM-2表达水平稍有增加,两组小鼠TREM-2表达水平在术后72h时有显著性差异(P0.05)。脓毒症小鼠血浆IL-4浓度在CLP术后24h达峰值,其动态变化趋势与TREM-2的表达变化相似,但要早于TREM-2。脓毒症小鼠腹腔细菌感染在CLP术后逐渐增加,于术后72h感染最严重,其动态变化与TREM-2的表达变化完全一致。但TREM-2的表达变化与血浆IL-13和IL-10的浓度变化无关。结论：在脓毒症小鼠中,TREM-2的表达水平呈先增强后减弱的变化特征,于脓毒症72h后达峰值。TREM-2的表达变化可能与IL-4的诱导性有关,而且可能在脓毒症感染的免疫防御中发挥重要作用。 第二部分阻断TREM-2对脓毒症发病的影响 研究目的：鉴于TREM-2在脓毒症发病过程中的表达变化特征,因此本部分研究主要探讨阻断内源性TREM-2的作用对脓毒症发病的影响及机制。研究方法：将CLP诱导的脓毒症小鼠,随机分为两组,在CLP18h后,通过尾静脉注射的方法分别给予20μg小鼠TREM-2/人IgG1重组蛋白(mTREM-2/IgG1组)和201μg人IgG1重组蛋白(IgG1组),观察其7天生存率。同时,分别于给予重组蛋白24h、72h和120h后,取腹腔灌洗液和外周血,采用琼脂平板培养法检测腹腔细菌感染程度,采用ELISA法检测腹腔灌洗液和外周血IL-10浓度。 结果：与IgG1组相比,mTREM-2/IgG1组小鼠7天生存率显著降低(8.3%vs.50%；P0.05)。给予重组蛋白24h后,两组小鼠腹腔细菌感染程度无显著性差异(P0.05)；给予重组蛋白72h和120h后,mTREM-2/IgG1组小鼠腹腔细菌感染均较IgG1组小鼠明显加重(P0.05)。两组小鼠腹腔灌洗液和外周血IL-10浓度无显著性差异。 结论：阻断TREM-2的作用降低脓毒症小鼠的7天生存率,其原因可能与加重脓毒症小鼠的细菌感染有关。 第三部分重组TREM-2对脓毒症的保护作用研究研究目的：鉴于TREM-2在脓毒症中呈诱导性表达,且其表达峰值较迟,而阻断TREM-2的作用则加重脓毒症的发病,因此本部分研究主要探讨在脓毒症发病早期重组TREM-2对脓毒症的保护作用及其机制。研究方法：构建表达TREM-2的重组腺病毒和对照腺病毒,分别感染BMMC,用Western-blot和流式细胞术分别检测TREM-2蛋白的表达水平。以高表达TREM-2的BMMC为研究对象,一方面采用激动性抗体激活TREM-2介导的信号通路,并用100ng/ml脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)刺激,观察重组TREM-2对炎症反应的影响；另一方面观察高表达TREM-2的BMMC对荧光颗粒和细菌的吞噬功能。将高表达TREM-2的BMMC于脓毒症模型诱导后不同时间点(2h、4h、6h)回输至小鼠体内,观察重组TREM-2对脓毒症小鼠7天生存率的影响。在脓毒症后2h细胞回输组,于细胞回输后24h和48h分别取小鼠外周血、腹腔灌洗液、肝脏、肺脏和脾脏等。采用琼脂平板培养法检测全身和局部细菌感染程度,采用ELISA法检测炎症因子IL-10浓度,采用组织化学法等观察脏器形态功能。结果：重组腺病毒能在BMMC中高表达TREM-2。激活BMMC中的TREM-2分子,能活化其下游的Akt信号分子,经LPS刺激后,显著增强IL-10mRNA水平。高表达TREM-2的BMMC对荧光颗粒和细菌均有显著增强的吞噬作用。脓毒症模型诱导后2h和4h回输高表达TREM-2的BMMC能明天改善小鼠的7天生存率。在脓毒症后2h细胞回输组,细胞回输24h和48h后小鼠全身和局部细菌负荷量明显下降,肝脏和肺脏损伤明显减轻,脾脏细胞凋亡减少,但外周血和腹腔灌洗液中IL-10水平无显著变化。 结论：脓毒症发病早期增强TREM-2的表达对脓毒症有保护作用,可有效改善脓毒症的预后；作用机制与其吞噬清除细菌的功能密切相关。
[Abstract]:Expression of first part TREM - 2 in septic mice and its relationship with sepsis

TREM - 2 ( TREM - 2 ) is a kind of cell surface receptor which is mainly expressed in activated macrophages and belongs to immunoglobulin superfamily . TREM - 2 can induce the expression of TREM - 2 in macrophages . TREM - 2 plays an important role in the regulation of sepsis and immune inflammation . Therefore , it is speculated that TREM - 2 may play an important role in the regulation of sepsis and immune inflammation . Therefore , this part studies the correlation between the expression level of TREM - 2 and the development of sepsis by detecting the expression level of TREM - 2 in the important organ / tissue macrophages of sepsis .

Methods : The expression level of TREM - 2 in liver , lung and spleen was determined by immunohistochemistry . The levels of TREM - 2 in liver , lung and spleen were detected by immunohistochemistry . The levels of TREM - 2 in liver , lung and spleen were detected by immunohistochemistry . The concentration of TREM - 2 was detected by enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) . The levels of IL - 4 , IL - 13 and IL - 10 in peripheral blood were detected by enzyme linked immunosorbent assay ( ELISA ) .

Results : The expression of TREM - 2 in septic mice was similar to that of TREM - 2 at 72 h after CLP . However , the change of TREM - 2 expression was similar to that of TREM - 2 at 72 h after operation .

The effect of TREM - 2 on the pathogenesis of sepsis

Objective : To investigate the effect and mechanism of blocking endogenous TREM - 2 on sepsis . Methods : After 24 hours , 72 h and 120 h after the administration of recombinant protein , 20 渭g mouse TREM - 2 / human IgG1 recombinant protein ( mTREM - 2 / IgG1 group ) and 20渭g human IgG1 recombinant protein ( IgG1 group ) were randomly divided into two groups .

Results : The 7 - day survival rate of mTREM - 2 / IgG1 group was significantly lower than that of IgG1 group ( 8.3 % vs . 50 % ) .
P0.05). After 24 h of recombinant protein , there was no significant difference between the two groups ( P0.05 ) .
After 72 h and 120 h of recombinant protein , the mice of mTREM - 2 / IgG1 group were significantly higher than those in IgG1 group ( P0.05 ) . There was no significant difference in the concentrations of IL - 10 in peritoneal lavage fluid and peripheral blood in both groups .

Conclusion : Blocking the effects of TREM - 2 on the 7 - day survival rate of septic mice may be related to the bacterial infection in septic mice .

The effect of TREM - 2 on sepsis was studied by Western - blot and flow cytometry .
The effect of recombinant TREM - 2 on 7 - day survival rate of mice was studied by means of agar plate culture .

Conclusion : The early enhancement of TREM - 2 expression in sepsis has protective effect on sepsis , which can effectively improve the prognosis of sepsis .
The mechanism of action is closely related to its phagocytic function .
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R459.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 王婧;阴峧宏;王超;张淑文;;脓毒症与抗凝治疗[J];中国医刊;2006年04期

2 赵凯峰;周伟娜;卜春红;张坤;;ω-3鱼油脂肪乳对脓毒症患者的临床疗效[J];山东医药;2011年16期

3 曾红科;江稳强;;脓毒症时肝功能不全[J];继续医学教育;2008年01期

4 刘清泉;张伟;姜良铎;;瘀毒伤络、阻络病机与脓毒症[J];中国中医药现代远程教育;2010年17期

5 胡阳全;金凌应;张翎;吴忠亮;赵卫中;;经皮肾镜取石术后尿脓毒症休克1例[J];中华腔镜泌尿外科杂志(电子版);2011年02期

6 任建安;张学文;;外科脓毒症病人的液体治疗[J];中国实用外科杂志;2010年06期

7 樊海宁;任利;邓勇;;脓毒症相关基因的多态性研究进展[J];青海医学院学报;2009年04期

8 孟繁u&;苏磊;陶雪飞;唐柚青;;脓毒症中精氨酸代谢变化及应用的研究进展[J];广东医学;2009年06期

9 王烁;;脓毒症与多器官功能障碍综合征[J];中国临床医生;2009年09期

10 周英智;郑星梅;李耘;;脓毒症患者血清脑钠肽水平的变化[J];山西医科大学学报;2011年04期

相关会议论文 前10条

1 莫绍春;马春林;;浅谈脓毒症休克的中医药治疗[A];首届全国中西医结合重症医学学术会议暨中国中西医结合学会重症医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2010年

2 方宇;周钢桥;王志富;冯凯;罗志毅;庞伟;李垒;凌焱;李玉霞;刘保池;;髓样分化因子88基因多态性与中国人群脓毒症易感性的研究[A];第六届全国中西医结合灾害医学学术会议学术论文集[C];2010年

3 杨兴易;;脓毒症诊断治疗进展[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

4 熊滨;林勇军;;小剂量氢化可的松在脓毒症休克治疗中的临床研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年

5 蔺际鑓;孔德全;杨成彬;吴郁珍;姚亚奔;刘加权;吴伟程;潘满冬;张自立;;蒙特利尔认知评估量表急诊筛查脓毒症相关性脑病[A];《中华急诊医学杂志》更名十周年、World Journal of Emergency Medicine创刊一周年庆典《中华急诊医学杂志》第十届组稿会、第三届急诊医学青年论坛论文汇编[C];2011年

6 周岁锋;郭应军;;重症监护病房脓毒症患者虚实辨证临床研究[A];首届全国中西医结合重症医学学术会议暨中国中西医结合学会重症医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2010年

7 张文筱;赵擎宇;吴仲凯;戴淑琴;方翼;;多烯磷脂酰胆碱对脓毒症大鼠的保护作用与PPARγ有关[A];2011·中国医师协会中西医结合医师大会论文集[C];2011年

8 周家兴;吕勤;;脓毒症患儿血浆脑钠肽浓度测定的临床意义[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年

9 徐秋萍;苏伟;;脓毒症心肌病[A];首届西湖重症医学论坛暨2011年浙江省重症医学学术年会论文汇编[C];2011年

10 刘旭;张_g;;脓毒症心功能变化及其监测的研究进展[A];2010全国中西医结合危重病、急救医学学术会议论文汇编[C];2010年

相关重要报纸文章 前5条

1 特约记者 石谙丁;小儿脓毒症抗菌要领(三)[N];医药经济报;2011年

2 中国科学院院士上海华山医院教授 沈自尹;清热解毒药可抑制过度免疫反应[N];健康报;2003年

3 瘳定国;冯琳;西南医院研制出抗内毒素多肽[N];中国医药报;2002年

4 通讯员冯琳记者冯竞;西南医院研制出抗内毒素多肽[N];科技日报;2002年

5 北京大学人民医院急诊科主治医师 余剑波;腹腔内压分级及对血流动力学的影响[N];医药经济报;2011年

相关博士学位论文 前10条

1 陈全福;益气活血法治疗脓毒症相关心肌抑制的临床及实验研究[D];广州中医药大学;2010年

2 金悦;脓毒症患者远期生活质量和核小体早期预警研究[D];浙江大学;2012年

3 谢克亮;氢气对脓毒症的保护效应及机制研究[D];天津医科大学;2013年

4 张辉;儿童重症监护病房中脓毒症及脓毒症急性肾脏损伤的临床研究[D];中南大学;2012年

5 李艳红;脓毒症时肾上腺皮质功能变化的研究[D];中国协和医科大学;2010年

6 李铭新;血浆透析滤过在脓毒症中的应用[D];复旦大学;2010年

7 张丽娜;脓毒症相关性脑病的临床及基础研究[D];中南大学;2012年

8 孙璐璐;大鼠革兰阴性菌和革兰阳性菌感染脓毒症模型的构建及代谢组学研究[D];第二军医大学;2010年

9 许煊;持续血液净化技术治疗脓毒症患儿疾病指证及治疗机制研究[D];南方医科大学;2011年

10 杨闻;法尼基转移酶抑制剂对脓毒症小鼠免疫功能及预后影响的实验研究[D];华中科技大学;2012年

相关硕士学位论文 前10条

1 赵阳;脓毒症休克患者死亡率及危险因素分析:生存患者与死亡患者间的比较[D];中国医科大学;2010年

2 刘旭;胸阻抗法无创心排量测定对脓毒症患者心功能评估的研究[D];大连医科大学;2010年

3 高敏;大鼠脓毒症预后判断指标集及预测模型的初步研究[D];中南大学;2010年

4 苑志勇;高密度脂蛋白水平及变化与脓毒症关系研究[D];青岛大学;2010年

5 胡慧卿;脓毒症患者血心型脂肪酸结合蛋白的变化及临床意义[D];天津医科大学;2010年

6 彭娜;乌司他丁对脓毒症心肌损伤的保护作用及机理探讨[D];南方医科大学;2010年

7 褚永果;脓毒症大鼠肾损伤的病理生理机制及血必净对其保护作用的实验研究[D];河北医科大学;2010年

8 陈媛;脓毒症三焦证候特点的临床研究[D];广州中医药大学;2011年

9 张德文;抗氧化剂对脓毒症大鼠肾脏功能保护作用的实验研究[D];安徽医科大学;2011年

10 金良;动态观察脓毒症患者外周血T淋巴细胞亚群变化的临床意义[D];天津医科大学;2011年

，

本文编号：1933927