COX-2参与烧伤诱导脂肪分解代谢的作用机制研究

发布时间：2018-11-12 18:36

【摘要】：目的：通过观察大鼠烧伤血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖活性和成脂分化能力的影响，探索烧伤血清参与脂肪分解代谢的分子机制。研究烧伤对BALB/c小鼠棕色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)的影响。研究塞来昔布对烧伤BALB/c小鼠脂肪分解代谢的影响并探讨其可能机制。方法第一部分：选择成年雄性SD大鼠48只，随机分为假伤组及烧伤1d、4d、7d、14d、21d组，每组8只。各烧伤组大鼠制备背部30%TBSA Ⅲ度烫伤模型，分别于对应时间点收集血清；假伤组只进行假伤处理，取血清作为对照。采用各组血清培养3T3-Ll前脂肪细胞，MTT法检测细胞增殖活性，选择细胞增殖最低组烧伤血清作为后续刺激血清。取3T3-Ll前脂肪细胞分别培养并分为假伤血清组、烧伤血清组、假伤血清成脂诱导组、烧伤血清成脂诱导组。倒置显微镜下观察细胞生长情况，诱导培养7d后进行油红O染色，进行脂肪细胞计数并测量吸光度（A）值，实时定量PCR以及Western blot检测过氧化物酶增殖体激动剂受体（preoxisomeproliferator activated receptorγ，PPARγ）和脂蛋白脂酶（lipoprotein lipase, LPL）基因及蛋白表达。方法第二部分：选择BALB/c雄性小鼠40只，随机分为对照组及烧伤组，每组20只。烧伤组采用BALB/c小鼠背部30%TBSA Ⅲ度烫伤模型，，观察两组间小鼠体重、体温、体脂百分比、白色脂肪组织(white adipose tissue, WAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)重量、形态学变化，以及解偶联蛋白-1(uncoupledprotein-1, UCP-1)表达水平的变化。方法第三部分：选择BALB/c雄性小鼠100只，随机分为对照组、塞来昔布组、烧伤组及烧伤塞来昔布治疗组，每组25只。采用BALB/c小鼠背部30%TBSAⅢ度烫伤模型，观察研究各组间小鼠体重、体温、体内水含量、体内脂肪含量、体内肌肉含量、体脂百分比、EE、RER、VO2、VCO2、白色脂肪组织(white adipose tissue,WAT)和棕色脂肪组织(brown adipose tissue, BAT)重量、形态学变化，解偶联蛋白-1(UCP-1)以及环氧酶-2(COX-2)基因及蛋白表达水平的变化。结果第一部分： SD大鼠血清培养3T3-Ll前脂肪细胞研究中，MTT法检测细胞增殖活性，与其余各组比较，烧伤4、7d组细胞增殖能力显著降低，其中7d组细胞增殖活性最低，取烧伤7d大鼠血清作为后续刺激血清。倒置相差显微镜下观察3T3-Ll细胞形态，假伤血清对照组、烧伤血清对照组对比无明显变化；3T3-Ll前脂肪细胞诱导培养后假伤血清成脂诱导组、烧伤血清成脂诱导组3T3-Ll前脂肪细胞呈脂肪细胞样变。其中假伤血清成脂诱导组成脂肪细胞量最多。油红O染色示，假伤血清成脂诱导组3T3-Ll前脂肪细胞染色呈阳性，烧伤血清成脂诱导组细胞为弱阳性，其余均为阴性；油红O染色后的脂肪细胞计数和油红O染色定量比较，假伤血清组与烧伤血清组比较（P0.05）有显著差异，假伤血清成脂诱导组与烧伤血清成脂诱导组比较（P0.05）有显著差异。实时定量PCR及Western blot检测示，烧伤血清组PPARγ基因表达量较假伤血清组明显下降（P0.05），但LPL基因表达量差异无统计学意义（P0.05）；PPARγ、LPL蛋白表达量假伤血清组和烧伤血清组间比较差异无统计学意义（P0.05）。烧伤血清导组诱导组PPARγ、LPL基因及蛋白表达量较假伤血清成脂诱导组均显著下降（P0.05）。结果第二部分：烧伤可引起BALB/c小鼠棕色脂肪、白色脂肪形态学显著变化。烧伤组小鼠的体重、WAT重量、白色脂肪体脂百分比均显著低于对照组(P0.05)，烧伤组小鼠体温、BAT重量、棕色脂肪体脂百分比及UCP-1蛋白表达量显著高于对照组（P0.05）。结果第三部分：烧伤组BALB/c小鼠体重、体内水分、脂肪、肌肉含量、WAT重量、白色脂肪体脂百分与烧伤塞来昔布组比较显著降低(P0.05)。烧伤组体温、EE、VO2、VCO2、COX-2及UCP-1蛋白表达量与烧伤塞来昔布组比较显著升高(P0.05)。各组之间小鼠活动度比较，无统计学意义。结论：烧伤血清可引起3T3-Ll前脂肪细胞成脂分化能力下降。棕色脂肪在烧伤后脂肪高分解代谢中具有一定作用。COX-2抑制剂塞来昔布可降低烧伤后白色脂肪高分解代谢。
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【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R644

【参考文献】