重组人HMGB1蛋白主动免疫对小鼠脓毒症的预防效应

发布时间：2021-08-09 17:12

背景：脓毒症早期起关键作用的是细胞因子。由于TNF-α和IL-1p等为早期一过性释放的致炎因子,因此针对TNF-α或者IL-1p等致炎介质的治疗窗口期非常短暂,并且对于炎症晚期所出现的脓毒症也显得无能为力。新发现的晚期炎症介质HMGB1,其促炎功能和动力学特点,使得它比一些早期炎症介质更具有潜在临床应用价值。目前很多研究者尝试采用各种措施来拮抗晚期炎症介质HMGB1的表达与释放,并取得了值得肯定的效果。因此我们尝试使用主动免疫的方法,探究主动免疫是否对脓毒症有预防效应。方法：通过分子生物学方法构建人HMGB1原核表达载体,并使用乳糖诱导表达得到重组人HMGB1蛋白；使用重组HMGB1对小鼠进行免疫；间接ELISA方法检测小鼠抗血清效价,并使用效价稳定后的小鼠血清为一抗进行Western blot检测；CLP模型检测免疫小鼠对脓毒症的预防效应；HE染色确定小鼠器官病理学变化；ELISA检测小鼠血浆中MGB1的含量。结果：构建得到带有His标签的HMGB1原核表达载体(pET28a-His-HMGBl);经乳糖诱导表达得到较纯的可溶重组人HMGB1蛋白；间接ELISA和Western blot检测共同确定小鼠经免疫后抗血清效价达到稳定；CLP模型检测发现,免疫组小鼠存活率显著提高,组织器官得到有效保护,且血浆中HMGB1含量较未免疫组小鼠有显著下降。结论：重组人HMGB1蛋白免疫后对小鼠脓毒症有预防效应,这为进一步探究主动免疫预防脓毒症奠定了基础。
【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R459.7

文章目录

摘要

Abstract

第1章绪论

1.1 脓毒症概述

1.1.1 脓毒症发病机制研究概述

1.1.2 脓毒症的治疗策略概述

1.1.3 结论

1.2 HMGB1概述

1.2.1 HMGB1的释放

1.2.2 HMGB1与细胞表面蛋白的结合

1.2.3 HMGB1在体外对炎症的介导作用

1.2.4 HMGB1在体内介导炎症反应

1.2.5 HMGB1在体内的积累

1.2.6 胞外HMGB1在致死性全身炎症中的作用

第2章研究假设

第3章重组人HMGB1蛋白主动免疫对小鼠脓毒症的预防效应

3.1 实验材料

3.1.1 实验动物

3.1.2 实验试剂

3.2 实验方法

3.2.1 重组人HMGB1蛋白的获得

3.2.2 重组人HMGB1蛋白免疫Bal b/c小鼠及免疫效果测定

3.2.3 重组人HMGB1蛋白免疫小鼠安全性评价

3.2.4 CLP模型检测免疫小鼠对脓毒症的预防效应

3.2.5 组织学检测免疫小鼠对脓毒症的预防效应

3.2.6 血液学检测重组HMGB1蛋白免疫对小鼠脓毒症的预防效应

3.3 实验结果

3.3.1 人HMGB1的序列

3.3.2 人HMGB1基因原核表达载体图谱

3.3.3 人HMGB1克隆载体菌落PCR鉴定结果图

3.3.4 人HMGB1原核表达载体的双酶切结果图

3.3.5 重组人HMGB1蛋白的原核表达

3.3.6 重组人HMGB1免疫小鼠安全性检测结果

3.3.7 免疫组小鼠抗血清效价测定

3.3.8 抗人HMGB1抗血清特异性鉴定

3.3.9 小鼠经重组人HMGB1蛋白免疫后能提高CLP模型的存活率

3.3.10 重组人HMGB1免疫能有效保护脓毒症小鼠的器官

3.3.11 重组人HMGB1蛋白免疫后能显著降低CLP小鼠血清中HMGB1的含量

3.4 讨论

附录

试剂配制

主要仪器设备

参考文献

在读期间发表的学术论文及研究成果

致谢

【相似文献】