真皮干细胞在创面修复中作用的初步研究

发布时间：2020-02-03 23:49

【摘要】：创面愈合是一个复杂的生物学过程，涉及多种修复细胞的增殖、迁移、分化、凋亡等过程，其可分为三个阶段即：炎症反应期、细胞增生期和组织重塑期。修复细胞是创面修复的主体，其生物学行为是创面愈合研究中的重要科学问题。研究表明，干细胞是组织自我更新和再生修复的细胞来源，其还通过分泌大量的细胞因子，促进肉芽组织形成、血管再生等修复过程。以往对表皮干细胞、毛囊干细胞与创面愈合的关系进行了较多研究，但对于原位真皮干细胞在创面愈合过程中的作用尚未完全阐明。 本课题重点研究了小鼠全层皮肤损伤后创面局部真皮干细胞是否被激活及其在创面修复中的作用。首先采用BrdU标记法分别检测全层皮肤损伤后创面局部修复细胞增殖反应的和标记滞留细胞（LRCs）的变化特点；进而分离和培养肉芽组织来源真皮干细胞，并通过与新生鼠真皮细胞和成年鼠真皮细胞在增殖能力、集落形成能力及多向诱导分化潜能等方面进行对比，研究了肉芽组织来源细胞的干细胞相关生物学特性；进一步通过检测肉芽组织来源细胞和成年鼠真皮细胞内活性氧(ROS)含量及ROS对肉芽组织来源细胞集落形成能力及多向诱导分化潜能的影响，探讨了ROS对创伤后真皮干细胞的调控作用，得到如下结果和结论： 1.采用短时间BrdU标记快速分裂细胞(RDCs)的方法检测了创面局部修复细胞增殖反应情况，发现在正常皮肤组织中，仅表皮、毛囊组织中存在少量的RDCs，但在创伤后创面局部的表皮、毛囊和真皮组织均发生了明显的细胞增殖反应，表明皮肤创伤后局部表皮、毛囊和真皮组织细胞参与了创伤修复。 2.采用连续BrdU标记的方法检测LRCs，发现创面愈合后肉芽组织中存在LRCs，而正常的真皮组织中未检测到LRCs，，在分离被标记的肉芽组织来源细胞后的体外培养发现，肉芽组织来源细胞具有集落形成能力，且在形成的集落中也发现存在LRCs，提示创伤后真皮干细胞被激活并参与了肉芽组织的形成。 3.通过比较肉芽组织来源细胞、成年鼠真皮细胞和新生鼠真皮细胞的的生物学特性，发现肉芽组织来源细胞较成年鼠真皮细胞和新生鼠真皮细胞有更强的增殖能力、集落形成能力和成骨、成脂诱导分化的能力，且表达间充质干细胞表面标志CD105，不表达造血干细胞标志CD45，进一步支持创伤后真皮干细胞被激活并参与组织修复。 4.通过检测内源性ROS，发现肉芽组织来源细胞中ROS水平较正常成年鼠真皮细胞明显增高(P0.01)，ROS清除剂NAC作用肉芽组织来源细胞后，其形成的集落数和集落的大小均显著高于对照组(P0.01)，而成脂、成骨分化与对照组相比没有明显差异，提示创伤后内源性ROS可抑制创面局部真皮干细胞自我更新能力，但对其分化潜能影响不明显。
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R641

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本文编号：2576164