R18多肽联合亚低温抑制细胞自噬对颅脑创伤后神经元保护作用的实验研究
发布时间：2020-12-03 07:05
目的:探讨R18多肽联合亚低温通过抑制细胞自噬对颅脑创伤（Traumatic Brain Injury,TBI）后神经元的保护作用及机制。方法:1)原代分离培养E18-19 SD大鼠皮质层神经元细胞并将细胞分组:对照组和谷氨酸诱导组。用免疫荧光对原代分离的神经元进行鉴定;用MTS检测细胞谷氨酸诱导72h后细胞的活力改变。采用落体打击的方法建立SD大鼠TBI模型,对照组不予以撞击。在模型建立72h和12d后剥离大鼠脑组织并采用Nissl染色来检测神经元细胞的损失;从模型建立后第一天开始采用钉板平衡木行走测试对大鼠的行为学进行检查;同时对大鼠神经功能缺损进行评分（modified neurological severity scores,mNSS）;2)将细胞分为五组:分别为对照组、谷氨酸处理组、亚低温处理组（32.0?0.5℃）、R18多肽处理组以及亚低温联合R18多肽处理组。对照组不施加任何处理因素,谷氨酸处理组为用谷氨酸处理并诱导神经元细胞损伤组,亚低温处理组、R18多肽处理组以及亚低温联合R18多肽处理组为在谷氨酸诱导神经元细胞损伤时分别施加对应的处理因素组,同时,R18多肽设置四...
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
神经元的分离、鉴定以及谷氨酸诱导Figure1.1Isolation，identificationandglutamicacidinductionofneuronsA为原代分离的神经元细胞，B为免疫荧光鉴定（Tubulin）C为谷氨酸诱导后细胞活力的改变；**P＜0.01，与对照组相比，差异有统计学意义
图 1.2 大鼠 TBI 模型的评估Figure 1.2 Evaluation of TBI of rats 为大鼠脑组织 Nissl 染色，B 为经 Nissle 染色后统计的神经元数量，C 为行为学检数统计；**P＜0.01，与对照组相比，差异有统计学意义。表 1.2 模型建立后不同时间点大鼠 mNSS 评分对比Table 1.2 mNSS scores change of different time point after model establishment模型建立后的时间（d）1 3 5 7 9 rol 2.6±1.1 2.8±0.8 2.8±0.8 2.6±1.1 2.4±1.3 2.6I 8.4±2.9* 13.6±2.3** 7.4±1.1* 6.3±1.5* 5.2±1.1* 4.3P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比，差异有统计学意义。
亚低温组为谷氨酸诱导的同时将细胞培养箱的温度调整至 32 0.5℃、R18 多肽联合亚低温组为在谷氨酸诱导的同时将用 R18 多肽进行处理并将培养箱的温度调整至 32 0.5℃，72h 后，用 MTS 法检测细胞活力，发现与对照组相比，谷氨酸诱导组细胞活力明显下降；与单纯谷氨酸诱导组相比，亚低温处理组和 R18 多肽处理组细胞的活力升高，且随着 R18 浓度的升高而升高，并且，R18 多肽联合亚低温处理组细胞活力高于单纯的亚低温处理组和单纯的 R18 多肽处理组，具体见表 2.1 图 2.1。表 2.1 R18 多肽和亚低温能提高神经细胞活力Table 2.1 R18 polypeptide and hypothermia can increase nerve cell viability组别 细胞活力百分比 组别 细胞活力百分比Control 100 0 亚低温+R18(0.2 M) 29.6 5.6*Glut 13.6 1.8##亚低温+R18(0.5 M) 53.0 8.0*R18(0.2 M) 23.5 4.9* 亚低温+R18(1.0 M) 79.1 4.9**R18(0.5 M) 34.5 6.3* 亚低温+R18(2.0 M) 92.9 2.1**R18(1.0 M) 69.9 3.7** 亚低温 35.1 6.6*R18(2.0 M) 89.4 1.2**
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用[J]. 杨岳,王阳,杨景兰,王佐周,侯伟健. 中药药理与临床. 2015(02)
[2]知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究[J]. 王琦,隋海娟,屈文慧,郁盛雪,金迎新,刘卓,金英. 中国药理学通报. 2013(02)
[3]阿托伐他汀对谷氨酸引起大鼠神经元损伤保护作用机制的研究[J]. 丁奇,董燕,金英,隋海娟. 中国药理学通报. 2010(12)
博士论文
[1]钙池调控的钙离子内流在高血糖诱导的神经元损伤中的作用机制研究[D]. 徐振宽.山东大学 2016
本文编号：2896170
【文章来源】：新疆医科大学新疆维吾尔自治区
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
神经元的分离、鉴定以及谷氨酸诱导Figure1.1Isolation，identificationandglutamicacidinductionofneuronsA为原代分离的神经元细胞，B为免疫荧光鉴定（Tubulin）C为谷氨酸诱导后细胞活力的改变；**P＜0.01，与对照组相比，差异有统计学意义
图 1.2 大鼠 TBI 模型的评估Figure 1.2 Evaluation of TBI of rats 为大鼠脑组织 Nissl 染色，B 为经 Nissle 染色后统计的神经元数量，C 为行为学检数统计；**P＜0.01，与对照组相比，差异有统计学意义。表 1.2 模型建立后不同时间点大鼠 mNSS 评分对比Table 1.2 mNSS scores change of different time point after model establishment模型建立后的时间（d）1 3 5 7 9 rol 2.6±1.1 2.8±0.8 2.8±0.8 2.6±1.1 2.4±1.3 2.6I 8.4±2.9* 13.6±2.3** 7.4±1.1* 6.3±1.5* 5.2±1.1* 4.3P＜0.05，**P＜0.01，与对照组相比，差异有统计学意义。
亚低温组为谷氨酸诱导的同时将细胞培养箱的温度调整至 32 0.5℃、R18 多肽联合亚低温组为在谷氨酸诱导的同时将用 R18 多肽进行处理并将培养箱的温度调整至 32 0.5℃，72h 后，用 MTS 法检测细胞活力，发现与对照组相比，谷氨酸诱导组细胞活力明显下降；与单纯谷氨酸诱导组相比，亚低温处理组和 R18 多肽处理组细胞的活力升高，且随着 R18 浓度的升高而升高，并且，R18 多肽联合亚低温处理组细胞活力高于单纯的亚低温处理组和单纯的 R18 多肽处理组，具体见表 2.1 图 2.1。表 2.1 R18 多肽和亚低温能提高神经细胞活力Table 2.1 R18 polypeptide and hypothermia can increase nerve cell viability组别 细胞活力百分比 组别 细胞活力百分比Control 100 0 亚低温+R18(0.2 M) 29.6 5.6*Glut 13.6 1.8##亚低温+R18(0.5 M) 53.0 8.0*R18(0.2 M) 23.5 4.9* 亚低温+R18(1.0 M) 79.1 4.9**R18(0.5 M) 34.5 6.3* 亚低温+R18(2.0 M) 92.9 2.1**R18(1.0 M) 69.9 3.7** 亚低温 35.1 6.6*R18(2.0 M) 89.4 1.2**
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用[J]. 杨岳,王阳,杨景兰,王佐周,侯伟健. 中药药理与临床. 2015(02)
[2]知母皂苷元对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用研究[J]. 王琦,隋海娟,屈文慧,郁盛雪,金迎新,刘卓,金英. 中国药理学通报. 2013(02)
[3]阿托伐他汀对谷氨酸引起大鼠神经元损伤保护作用机制的研究[J]. 丁奇,董燕,金英,隋海娟. 中国药理学通报. 2010(12)
博士论文
[1]钙池调控的钙离子内流在高血糖诱导的神经元损伤中的作用机制研究[D]. 徐振宽.山东大学 2016
本文编号：2896170
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