创伤后游离核酸促炎促凝及聚阳离子材料抑制作用的研究

发布时间：2021-04-17 11:59

　　一、研究背景创伤是一个重要的全球公共卫生问题,根据世界卫生组织的统计数据,全球每6秒钟就会有一个人遭受到创伤,每年有超过500万人因创伤而死亡,约占全世界总死亡人数的10%,是疟疾、结核病和艾滋病总和的1.7倍^[1]。损伤相关分子模式（Danger induced molecular patterns,DAMPs）是机体受到严重创伤后从受损细胞或细胞外基质中释放到血液和组织液中的一类分子^[2,3]。这些DAMPs能够被在哺乳动物细胞中表达的模式识别受体识别,触发细胞内信号级联反应,激活NF-k B等炎症相关通路,诱导局部及全身炎症反应^[4,5]。DAMPs种类很多,而这其中,细胞外游离核酸（包括DNA、RNA、micro RNA等）是重要的一类,在细胞坏死、组织损伤以及免疫细胞（如中性粒细胞和单核细胞）被激活产生NETs过程中释放进入血液循环,能够被免疫炎症细胞的TLR3、7、8、9等核酸识别受体所识别,诱发机体局部或全身炎症反应,进而最终导致多器官功能障碍等严重并发症的发生发展^[6-8]。同时,创... 

【文章来源】：中国人民解放军海军军医大学上海市 211工程院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

创伤患者和健康者血浆中游离核酸分析结果。A,创伤患者和健康捐献者血浆中游离dsDNA差别图;B,创伤患者和健康捐献者血浆中游离microRNA差别图。

在本部分实验中,根据前期加入不同体积的血浆对TLR的激活效果的摸索,最后统一使用了10μl健康者或创伤病人血浆刺激TLR3和TLR9,结果如图1-2所示,与健康捐献者血浆相比,创伤患者血浆能够明显激活TLR3和TLR9,且此激活效应能够被5μg/ml的聚阳离子材料HPT所抑制。(四)HDF DAMPs激活TOLL样受体

在本部分研究中,主要采用了两种方法制作细胞损伤模型,分别是反复冻融法和超声破碎法。两种损伤模型均可以造成细胞的不可逆行损伤和死亡,在离心去除细胞残渣后获得DAMPs,通过DNA及RNA试剂盒检测并标定DAMPs中的DNA和RNA含量。为了更好的显示DAMPs对不同TLR的激活能力,在以下实验中刺激TLR时均采用DNA浓度作为统一参照。TLR3、TLR8和TLR9分别是识别dsRNA、ssRNA和非甲基化DNA的核酸受体,在炎症中起着重要的作用,为了使加入的DAMPs的量保持一致,使用了DNA溶度分别为10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml和1μg/ml的DAMPs刺激TLRs,实验发现两种DAMPs均能有效激活TLR3,TLR8和TLR9,且整体呈剂量依赖性趋势。本实验证明了细胞在受到损伤后在其死亡以及死亡的过程中能够向胞外释放游离的DNA和RNA,而这些游离的DNA和RNA可以进一步激活TLR,诱导机体炎症反应。2. HDF DAMPs来源的基因组DNA不能激活TLR9,而RNA能够激活TLR3


本文编号：3143416