TLR4介导自噬流在脂多糖诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用研究

发布时间：2021-06-05 05:27

　　目的:探讨自噬流与脂多糖（LPS）诱导肾小管上皮细胞（HK-2细胞）炎症反应的关系,检测Toll样受体（TLR4）是否参与其中。方法:实验分为以下5组:阴性对照组、LPS（100μg/mL）组、LPS（100μg/mL）+雷帕霉素（RAP）（10μmol/L）组、LPS（100μg/mL）+氯喹（CQ）（10μmol/L）组、LPS（100μg/mL）+TAK242（TLR4拮抗剂）（2μmol/L）组,刺激HK-2细胞,通过实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测白细胞介素-1β（IL-1β）、TLR4、选择性自噬接头蛋白（P62）和自噬微管相关蛋白1轻链3（LC3）mRNA表达和Western blotting检测IL-1β、TLR4、P62和LC3蛋白表达;采用自噬双标腺病毒（mRFP-GFP-LC3）转染HK-2细胞检测自噬流,在共聚焦显微镜下观察自噬体与自噬溶酶体数量变化以判断自噬流表达情况。结果:与阴性对照组比较,LPS可诱导HK-2细胞IL-1β、TLR4和P62 mRNA和蛋白表达上调（P<0.05）,LC3 mRNA和LC3-Ⅱ蛋白表达上调（P<0.05）... 

【文章来源】：广西医科大学学报. 2020,37(05)

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【部分图文】：

qPCR检测RAP、CQ、TAK242对LPS刺激HK-2细胞IL-1β、TLR4、LC3、P62基因表达的影响

图1 qPCR检测RAP、CQ、TAK242对LPS刺激HK-2细胞IL-1β、TLR4、LC3、P62基因表达的影响2.3.2 mRFP-GFP-LC3检测自噬流结果

与阴性对照组比较，LPS组黄色斑点数量明显增多，红色斑点很少，表明自噬体明显增多，自噬溶酶体很少，说明LPS可诱导自噬流障碍；与LPS组比较，LPS+RAP组红色斑点数量明显增多，表明自噬溶酶体明显增多，说明RAP改善自噬流障碍；LPS+CQ组黄色斑点数量增多，基本无红色斑点，表明自噬体增多，自噬溶酶体基本不存在，说明CQ使自噬流受阻；LPS+TAK242组红色斑点数量明显增多，表明自噬溶酶体明显增多，与RAP组的结果相似，说明TAK242也可逆转LPS诱导的自噬流障碍，TLR4可调控自噬流，见图3。3 讨论


本文编号：3211530