20-HETE抑制剂对未成熟大脑创伤性脑损伤后小胶质细胞的影响及机制探讨
发布时间：2021-06-23 02:46
第一部分20-HETE抑制剂对幼鼠创伤性脑损伤后小胶质细胞激活的影响目的:探讨幼鼠创伤性脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）后小胶质细胞的激活特点,以及使用20-HETE抑制剂后对脑内小胶质细胞的影响。方法:选用生后9天的雄性SD大鼠,随机分为Sham组,TBI+Vehicle组,TBI+HET0016组。Sham组仅行开颅和缝合处理。其余两组均使用控制性皮层冲击损伤（Controlled cortical impact,CCI）仪复制创伤性脑损伤模型。TBI+HET0016组在损伤后5分钟及3小时腹腔注射20-HETE抑制剂HET0016溶液（1mg/kg）,TBI+Vehicle组在相同时间点腹腔注射同等剂量的45%β-环糊精溶液。在TBI后3天,脑组织不同区域冰冻切片进行Iba-1的DAB染色,观察小胶质细胞的区域分布特点以及创伤性脑损伤后小胶质细胞形态变化。皮层区进行CD68/Iba-1免疫荧光,观察脑损伤后小胶质细胞的激活特点以及HET0016对皮层区小胶质细胞的影响。海马区进行CD68免疫荧光染色,观察小胶质细胞变化情况以及HET0016对海马区小...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
开颅位置
图 1-2 控制性皮层损伤仪Figure1-2 Controlled cortical impact device1.2.2 标本的处理和取材SD 大鼠于 TBI 后 3 天 1.5%戊巴比妥钠（2ml/kg）腹腔麻醉，待大鼠对疼痛无反应后仰卧固定于泡沫板上，固定四肢。沾取一定量生理盐水将腹部毛发打湿，左手持镊子夹起腹部皮肤，右手持剪刀沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪开，将皮肤翻向两侧，用骨科剪沿胸骨中线剪开胸骨，沿膈肌向两侧切开，并用止血钳将胸骨及胸部皮肤钳紧，将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。分离出主动脉，穿一根丝线，将左心室尖用眼科剪剪开一小口，迅速插入灌注针，用丝线结扎牢固。打开调节阀，灌注生理盐水。剪开右心耳，使血液流出，观察肝脏逐渐变为白色/流出液体清亮后更换固定液。4%多聚甲醛固定液进入大鼠血管后，逐渐出现四肢抽动，待抽动完全停止，全身组织变硬即可取
图 1-3 TBI 后 3 天大鼠大脑 Iba-1 抗体 DAB 染色 ×400 (各组 n=4)A.损伤周围皮质区； B.皮质区；C.胼胝体；D.海马；E.纹状体；F.丘脑，G.梨状皮层1.患侧大脑半球 2.对侧大脑半球 3.正常大脑半球Figure1-3 Iba-1 DAB staining in SD rat‘s brain after 3d of TBIA.Injured area surrounding cortex; B.Cortex; C. Corpus callosum; D. Hippocampus; E.Corpus striatum; F. Thalamus; G. Piriform cortex; 1. Hemisphere of injured side 2.Hemisphere of another side 3. Hemisphere of sham group2.2 皮层区 CD68 和 Iba-1 表达使用 CD68 标记活化的小胶质细胞，Iba-1 标记小胶质细胞/巨噬细胞。如图1-4，通过免疫荧光染色，可见 DAPI 标记的细胞核呈蓝色荧光，FITC 标记的 CD68显示活化小胶质细胞呈绿色荧光，Alexa Flour 标记的 Iba-1 显示小胶质细胞呈红色荧光。如图 1-4 所示，与 Sham 组比较，创伤性脑损伤（TBI+Vehicle）组CD68 和 Iba-1 表达明显增加。HET0016 治疗（TBI+HET0016）组与 TBI+Vehicle
本文编号：3244066
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
开颅位置
图 1-2 控制性皮层损伤仪Figure1-2 Controlled cortical impact device1.2.2 标本的处理和取材SD 大鼠于 TBI 后 3 天 1.5%戊巴比妥钠（2ml/kg）腹腔麻醉，待大鼠对疼痛无反应后仰卧固定于泡沫板上，固定四肢。沾取一定量生理盐水将腹部毛发打湿，左手持镊子夹起腹部皮肤，右手持剪刀沿腹中线和胸骨剑突中线向上将皮肤剪开，将皮肤翻向两侧，用骨科剪沿胸骨中线剪开胸骨，沿膈肌向两侧切开，并用止血钳将胸骨及胸部皮肤钳紧，将止血钳翻向外侧以充分暴露心脏。分离出主动脉，穿一根丝线，将左心室尖用眼科剪剪开一小口，迅速插入灌注针，用丝线结扎牢固。打开调节阀，灌注生理盐水。剪开右心耳，使血液流出，观察肝脏逐渐变为白色/流出液体清亮后更换固定液。4%多聚甲醛固定液进入大鼠血管后，逐渐出现四肢抽动，待抽动完全停止，全身组织变硬即可取
图 1-3 TBI 后 3 天大鼠大脑 Iba-1 抗体 DAB 染色 ×400 (各组 n=4)A.损伤周围皮质区； B.皮质区；C.胼胝体；D.海马；E.纹状体；F.丘脑，G.梨状皮层1.患侧大脑半球 2.对侧大脑半球 3.正常大脑半球Figure1-3 Iba-1 DAB staining in SD rat‘s brain after 3d of TBIA.Injured area surrounding cortex; B.Cortex; C. Corpus callosum; D. Hippocampus; E.Corpus striatum; F. Thalamus; G. Piriform cortex; 1. Hemisphere of injured side 2.Hemisphere of another side 3. Hemisphere of sham group2.2 皮层区 CD68 和 Iba-1 表达使用 CD68 标记活化的小胶质细胞，Iba-1 标记小胶质细胞/巨噬细胞。如图1-4，通过免疫荧光染色，可见 DAPI 标记的细胞核呈蓝色荧光，FITC 标记的 CD68显示活化小胶质细胞呈绿色荧光，Alexa Flour 标记的 Iba-1 显示小胶质细胞呈红色荧光。如图 1-4 所示，与 Sham 组比较，创伤性脑损伤（TBI+Vehicle）组CD68 和 Iba-1 表达明显增加。HET0016 治疗（TBI+HET0016）组与 TBI+Vehicle
本文编号：3244066
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