PLK1介导m-TOR信号通路调控细胞自噬在脓毒症肠屏障功能障碍中的作用及机制
发布时间：2021-08-30 01:31
目的通过在体和离体实验,探讨脓毒症发生时PLK1与mTOR、自噬之间的相互调控关系,并对其在肠屏障功能障碍中的作用及机制进行研究。方法在体实验:取发育良好的六周龄雌性C57小鼠30只,随机分成3组（n=10）:假手术组（SHAM）、脓毒症组（CLP）和PKI脓毒症组（PLK1转基因小鼠进行CLP造模）,采取CLP（Cecal Ligation and Puncture,盲肠结扎穿孔术）制备脓毒症模型,对照组打开腹腔,不进行盲肠结扎穿孔术。造模后24h处死取血进行Elisa检测血清TNF-α水平,然后取近盲端小肠5cm,分别进行组织包埋、切片、HE染色,观察小肠组织病理学改变。小肠上皮细胞p-mTOR、自噬分子Lc3、p62使用免疫组化进行测定。PLK1及小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、occuludin使用western blot进行测定。离体实验:结肠上皮细胞NCM460作为模式细胞,使用LPS（30μg/ml）处理36h后收取细胞检测PLK1、p-mTOR、自噬分子Lc3、p62以及细胞紧密连接蛋白ZO-1、occuludin等的蛋白表达变化;同样的实验条件下进行CO-IP（免疫...
【文章来源】：皖南医学院安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1两组小鼠在行为学及血清炎症因图1（A）两组小鼠行为学比较图
图2（A）两组小鼠肠组织HE染色
皖南医学院硕士学位论文26andpiloerection;Aclearpurulenteffusioncanbeseenaftertheabdominalcavity,andtheintestinalwallisweakandeasilybroken.B.ElisadetectionofthetwogroupsofserumobtainedbycentrifugationshowedthatthecontentofCLPgroupinthetumornecrosisfactorTNF-αwassignificantlyhigherthanthatintheshamoperationgroup（n=10，p＜0.001）.二、小鼠CLP造模术后24小时，肠组织损伤明显将4周龄的雌性C57小鼠分成两组，每组10只，进行CLP盲肠结扎穿孔术，24小时后处死取肠组织，其中各组取5只进行HE染色，观察小肠组织形态学改变；其余5只使用组织研磨器研磨，并使用变形蛋白裂解液裂解提取蛋白，进行Westernblot检测。结果表明CLP组小鼠小肠组织绒毛明显萎缩脱落，形态完整性遭到破坏；而Westernblot检测显示CLP组小鼠小肠组织内细胞间紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达明显下调，进一步说明了CLP造模后小鼠表现出显著的肠组织损伤。同时伴随着PLK1的表达下调，可能与肠组织损伤机制有关（图2）。图2小鼠进行CLP造模术后24小时小肠组织明显受损A.小鼠造模后24小时，处死取小肠组织进行HE染色，观察小肠上皮组织形态学改变。B.操作同上，将小肠组织取出提取蛋白并进行Westernblot检测PLK1、ZO-1、occludin的表达，GAPDH为内参对照。图2（A）两组小鼠肠组织HE染色图2（B）两组小鼠肠组织紧密连接蛋白WB检测
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄素改善脓毒症肠机械屏障损伤的研究进展[J]. 李艳君,郭瑞敏,孙燕妮. 中国中医急症. 2019(03)
[2]脓毒症的肠道发病机制研究进展[J]. 金鹏锋,陈琳,胡耀仁,蔡挺. 中华医院感染学杂志. 2018(10)
[3]脓毒症与胃肠道功能损伤的关系及研究进展[J]. 张俊亮,曾其毅. 实用医学杂志. 2016(17)
[4]Genetic factors that affect nonalcoholic fatty liver disease: A systematic clinical review[J]. Tyler J Severson,Siddesh Besur,Herbert L Bonkovsky. World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[5]慢重症患者肠屏障功能的维护[J]. 吴秀文,任建安,黎介寿. 中华胃肠外科杂志. 2016 (07)
[6]保罗样激酶PLK1与肿瘤预后及治疗研究进展[J]. 蒋思明,王朝霞. 现代肿瘤医学. 2013(03)
[7]脓毒症定义及诊断的新认识[J]. 姚咏明,盛志勇,林洪远,柴家科. 中国危重病急救医学. 2004(06)
硕士论文
[1]PLK1调节NF-κB通路在脓毒症肠屏障功能障碍中的作用[D]. 曹迎亚.皖南医学院 2015
本文编号：3371785
【文章来源】：皖南医学院安徽省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图1两组小鼠在行为学及血清炎症因图1（A）两组小鼠行为学比较图
图2（A）两组小鼠肠组织HE染色
皖南医学院硕士学位论文26andpiloerection;Aclearpurulenteffusioncanbeseenaftertheabdominalcavity,andtheintestinalwallisweakandeasilybroken.B.ElisadetectionofthetwogroupsofserumobtainedbycentrifugationshowedthatthecontentofCLPgroupinthetumornecrosisfactorTNF-αwassignificantlyhigherthanthatintheshamoperationgroup（n=10，p＜0.001）.二、小鼠CLP造模术后24小时，肠组织损伤明显将4周龄的雌性C57小鼠分成两组，每组10只，进行CLP盲肠结扎穿孔术，24小时后处死取肠组织，其中各组取5只进行HE染色，观察小肠组织形态学改变；其余5只使用组织研磨器研磨，并使用变形蛋白裂解液裂解提取蛋白，进行Westernblot检测。结果表明CLP组小鼠小肠组织绒毛明显萎缩脱落，形态完整性遭到破坏；而Westernblot检测显示CLP组小鼠小肠组织内细胞间紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达明显下调，进一步说明了CLP造模后小鼠表现出显著的肠组织损伤。同时伴随着PLK1的表达下调，可能与肠组织损伤机制有关（图2）。图2小鼠进行CLP造模术后24小时小肠组织明显受损A.小鼠造模后24小时，处死取小肠组织进行HE染色，观察小肠上皮组织形态学改变。B.操作同上，将小肠组织取出提取蛋白并进行Westernblot检测PLK1、ZO-1、occludin的表达，GAPDH为内参对照。图2（A）两组小鼠肠组织HE染色图2（B）两组小鼠肠组织紧密连接蛋白WB检测
【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄素改善脓毒症肠机械屏障损伤的研究进展[J]. 李艳君,郭瑞敏,孙燕妮. 中国中医急症. 2019(03)
[2]脓毒症的肠道发病机制研究进展[J]. 金鹏锋,陈琳,胡耀仁,蔡挺. 中华医院感染学杂志. 2018(10)
[3]脓毒症与胃肠道功能损伤的关系及研究进展[J]. 张俊亮,曾其毅. 实用医学杂志. 2016(17)
[4]Genetic factors that affect nonalcoholic fatty liver disease: A systematic clinical review[J]. Tyler J Severson,Siddesh Besur,Herbert L Bonkovsky. World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[5]慢重症患者肠屏障功能的维护[J]. 吴秀文,任建安,黎介寿. 中华胃肠外科杂志. 2016 (07)
[6]保罗样激酶PLK1与肿瘤预后及治疗研究进展[J]. 蒋思明,王朝霞. 现代肿瘤医学. 2013(03)
[7]脓毒症定义及诊断的新认识[J]. 姚咏明,盛志勇,林洪远,柴家科. 中国危重病急救医学. 2004(06)
硕士论文
[1]PLK1调节NF-κB通路在脓毒症肠屏障功能障碍中的作用[D]. 曹迎亚.皖南医学院 2015
本文编号：3371785
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