STIM1激活在百草枯所致急性肺损伤中的作用及其机制研究

发布时间：2021-11-10 21:44

　　背景:百草枯（paraquat,PQ）是一种常被误用的剧毒除草剂,尤其在发展中国家,因百草枯中毒死亡的现象非常常见。相较于PQ中毒引起的慢性肺纤维化的大量研究报道,急性大量PQ中毒引起的急性肺损伤背后的机制,仍然缺乏相应的研究。在各种外界条件的刺激下,细胞内钙稳态的改变和氧化应激的产生,都与细胞周期进程和细胞死亡紧密相关。PQ被公认可以引起氧化应激的产生,但是否钙离子参与其中的调控机制仍是未知的。近期有研究发现,在内质网上一个功能多样的钙离子感受器——基质相互作用分子1（STIM1）,能有效感受内质网内钙离子浓度的变化从而发挥对细胞各项功能的调控作用。然而,STIM1在PQ诱导的急性肺中毒中的调节机制和作用仍然缺乏相应的研究。本研究的目的是探讨PQ诱导肺急性中毒的分子和细胞机制,从而能进一步确定钙信号和活性氧簇（ROS）是否参与调控机制的作用。方法:1.C57BL/6小鼠腹腔注射75mg/kg PQ处理48h构建PQ急性中毒的在体模型,16HBE用于体外模型的构建;2.LDH、MTT试剂盒以及台盼蓝染色用于检测PQ处理用细胞死亡情况,TUNEL试剂盒用于检测细胞凋亡情况;3.构建STI... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PQ急性肺损伤模型肺组织HE染色（A），IL-6mRNA的表达（B），肺组织周期相关蛋白的转录和蛋白水平变化

图 2 PQ 引起细胞死亡，且随剂量依赖性增加（A-C），细胞形态变化明显（D），晚期以凋亡为主（E）台盼蓝染色活细胞后，更为直观地展示了细胞活性的占比情况（图 2C）。如图 2D，在显微镜下，明场视野拍摄清晰显示大剂量 PQ 急性损伤，细胞逐渐失去原有的形态，细胞之间连接缺失，排布紊乱，大量细胞死亡漂浮不再贴壁。我们接下来使用了 TUNEL 染色分析了在 24h 和 48h PQ 处理后细胞凋亡的情况。结果如图 2E 所示，处理 48h 后，绿色染色（凋亡细胞）和不规则形态的TUNEL 阳性细胞的数目明显的增加，说明 PQ 处理 48h 后引起了细胞核皱缩和大量细胞的凋亡，与此同时，我们并没有观察到对照组中有任何 TUNEL 阳性的细胞。3. PQ 能够引起细胞 S 期周期停滞根据以前的研究，细胞周期阻滞是抑制细胞增殖和导致细胞死亡（尤其是

31图 3 PQ 处理后，流式细胞术检测细胞各周期分布（A），DAPI 染色分析细胞核直径变化（B），细胞周期相关蛋白 mRNA 和蛋白水平变化（C-E）如图 3A 所示，流式细胞术分析多次 PQ 处理结果。经统计后，我们发现 PQ处理实验组 16HBE 处于 G1 期的细胞数比例平均为 45.24%，明显低于对照组的67.62%。与 G1 期的减少相反，实验组处于 S 期的细胞数比例平均为 47.90%，显着高于对照组的 23.06%。此外，我们观察发现，细胞在 PQ 处理后有明显的细胞核增大的趋势，为进行半定量的分析，我们通过对细胞进行 DAPI 染色，使用荧光显微镜相同条件下拍摄单层照片，并使用 ImageJ 定量核的直径。如图 3B


本文编号：3487990