前列腺素E2激活EP4缓解APAP诱导小鼠急性肝衰竭的机制研究
发布时间：2022-01-05 15:55
背景:急性肝衰竭（Acute liver failure,ALF）是严重的突发性肝损伤,可由多种原因引起,过量摄入对乙酰氨基酚（Acetaminophen,APAP）是其中的常见病因。APAP可通过耗竭细胞内谷胱甘肽的方式直接损伤肝细胞,导致肝细胞死亡。坏死的肝细胞释放大量的损伤相关分子模式,激活以肝巨噬细胞为主的一系列免疫细胞,调节整个病理过程。PGE2,作为人体内的各种前列腺素中含量最为丰富的一种,在生物体中的分布最为广泛,具有多种生物学活性。在炎症过程时,PGE2可发挥促炎或抑炎作用,其最终作用取决于细胞类型、局部的PGE2浓度、受体类型及组织微环境。研究报道,PGE2在半乳糖胺/脂多糖、APAP和四氯化碳诱导的急性肝衰竭模型中均表现出了显著的缓解作用。但是,PGE2缓解APAP诱导急性肝衰竭的机制仍不明晰。目的:明确dmPGE2对APAP诱导的小鼠ALF的缓解作用;探讨PGE2在APAP诱导小鼠ALF过程中调控巨噬细胞功能的作用及其机制;构建APAP诱导肝细胞损伤模型,探讨PGE2对APAP损伤肝细胞的缓解作用及机制。方法:（1）建立APAP诱导ALF小鼠模型,设生理盐水对照组...
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RTCA实时无标记细胞功能分析仪原理图
浙江大学硕士学位论文正文实验方法16(1)将细胞以1×10^6/mL细胞密度种于6孔板，在细胞汇合度为70%–90%的时候转染；(2)每孔使用125μLDMEM培养基稀释7.5μLLipofectamine3000试剂，充分混匀;(3)每孔使用125μLDMEM培养基稀释2.5μg的质粒，制备质粒预混液，同时添加5μLP3000试剂，充分混匀；(4)在每管已稀释的Lipofectamine3000试剂以1:1比例加入P3000稀释的DNA；(5)在室温条件下孵育10–15分钟；(6)将质粒-脂质复合物加至细胞中，6孔板每孔加入孵育后混合液250μL。图S2EP4/阴性对照过表达载体质粒图谱3.13统计分析本文中的计量数据均以平均值±标准误（SEM）或平均值±标准差（SD）表示。用t检验对两个独立样本组间进行统计比较，两侧的p值小于0.05可认为两组之间的差异有统计学意义。统计分析和图表制作均在GraphPadPrism7（GraphPadSoftware）软件上进行。。
浙江大学硕士学位论文正文实验结果174.实验结果4.1建立APAP诱导的ALF小鼠模型用不同剂量的对乙酰氨基酚（APAP）和作用时间来建立适合的APAP诱导小鼠ALF模型。控制变量包括3点：APAP注射浓度（总液体注射体积），APAP注射剂量，APAP作用时间。选取合适的APAP浓度和作用时间点。I.APAP注射浓度对模型的影响用500mg/kgAPAP剂量，作用5.5小时作为起始标准，分别用总液体注射体积1.5mL、500μL对小鼠进行腹腔注射，对照组为500μL生理盐水腹腔注射。每组各3只，作用5.5h后各组无小鼠死亡，取外周血血清检测AST及ALT。结果显示1.5mL组ALT上升明显（p<0.01），AST上升不明显；500μL组AST、ALT上升均明显（p<0.0001），且远高于1.5mL组（图1）。因AST存在于肝细胞线粒体中而ALT存在于肝细胞胞质内，ALT上升显著而AST上升轻微提示1.5mL组肝损伤状况较轻。所以设置之后的实验，总液体注射体积（包括PGE2与拮抗剂）在500μL左右。图1不同注射剂量对APAP诱导小鼠ALF的转氨酶的影响检测来自control（n=3），1.5mL注射组（n=3）和500μL注射组（n=3）的外周血AST与ALT水平。所有样本均用自动生化分析仪检测。数值用平均值±SD表示。误差条表示SD。统计方法采用独立样本t检验。ns没有统计学差异，*p<0.05，**p<0.01，
【参考文献】：
期刊论文
[1]mPGES-1 expression in non-cancerous liver tissue impacts on postoperative recurrence of HCC[J]. Koichi Nonaka,Hikaru Fujioka,Yasushi Takii,Seigo Abiru,Kiyoshi Migita,Masahiro Ito,Takashi Kanematsu,Hiromi Ishibashi. World Journal of Gastroenterology. 2010(38)
[2]Cyclooxygenases in hepatocellular carcinoma[J]. Melchiorre Cervello,Giuseppe Montalto. World Journal of Gastroenterology. 2006(32)
[3]实验性暴发性肝衰竭中肿瘤坏死因子α与肝细胞凋亡的关系[J]. 王玉梅,冯国和,李颖,赵桂珍,乔光彦. 中国医科大学学报. 2002(06)
硕士论文
[1]内毒素诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究[D]. 罗杰.南昌大学 2007
本文编号：3570638
【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RTCA实时无标记细胞功能分析仪原理图
浙江大学硕士学位论文正文实验方法16(1)将细胞以1×10^6/mL细胞密度种于6孔板，在细胞汇合度为70%–90%的时候转染；(2)每孔使用125μLDMEM培养基稀释7.5μLLipofectamine3000试剂，充分混匀;(3)每孔使用125μLDMEM培养基稀释2.5μg的质粒，制备质粒预混液，同时添加5μLP3000试剂，充分混匀；(4)在每管已稀释的Lipofectamine3000试剂以1:1比例加入P3000稀释的DNA；(5)在室温条件下孵育10–15分钟；(6)将质粒-脂质复合物加至细胞中，6孔板每孔加入孵育后混合液250μL。图S2EP4/阴性对照过表达载体质粒图谱3.13统计分析本文中的计量数据均以平均值±标准误（SEM）或平均值±标准差（SD）表示。用t检验对两个独立样本组间进行统计比较，两侧的p值小于0.05可认为两组之间的差异有统计学意义。统计分析和图表制作均在GraphPadPrism7（GraphPadSoftware）软件上进行。。
浙江大学硕士学位论文正文实验结果174.实验结果4.1建立APAP诱导的ALF小鼠模型用不同剂量的对乙酰氨基酚（APAP）和作用时间来建立适合的APAP诱导小鼠ALF模型。控制变量包括3点：APAP注射浓度（总液体注射体积），APAP注射剂量，APAP作用时间。选取合适的APAP浓度和作用时间点。I.APAP注射浓度对模型的影响用500mg/kgAPAP剂量，作用5.5小时作为起始标准，分别用总液体注射体积1.5mL、500μL对小鼠进行腹腔注射，对照组为500μL生理盐水腹腔注射。每组各3只，作用5.5h后各组无小鼠死亡，取外周血血清检测AST及ALT。结果显示1.5mL组ALT上升明显（p<0.01），AST上升不明显；500μL组AST、ALT上升均明显（p<0.0001），且远高于1.5mL组（图1）。因AST存在于肝细胞线粒体中而ALT存在于肝细胞胞质内，ALT上升显著而AST上升轻微提示1.5mL组肝损伤状况较轻。所以设置之后的实验，总液体注射体积（包括PGE2与拮抗剂）在500μL左右。图1不同注射剂量对APAP诱导小鼠ALF的转氨酶的影响检测来自control（n=3），1.5mL注射组（n=3）和500μL注射组（n=3）的外周血AST与ALT水平。所有样本均用自动生化分析仪检测。数值用平均值±SD表示。误差条表示SD。统计方法采用独立样本t检验。ns没有统计学差异，*p<0.05，**p<0.01，
【参考文献】：
期刊论文
[1]mPGES-1 expression in non-cancerous liver tissue impacts on postoperative recurrence of HCC[J]. Koichi Nonaka,Hikaru Fujioka,Yasushi Takii,Seigo Abiru,Kiyoshi Migita,Masahiro Ito,Takashi Kanematsu,Hiromi Ishibashi. World Journal of Gastroenterology. 2010(38)
[2]Cyclooxygenases in hepatocellular carcinoma[J]. Melchiorre Cervello,Giuseppe Montalto. World Journal of Gastroenterology. 2006(32)
[3]实验性暴发性肝衰竭中肿瘤坏死因子α与肝细胞凋亡的关系[J]. 王玉梅,冯国和,李颖,赵桂珍,乔光彦. 中国医科大学学报. 2002(06)
硕士论文
[1]内毒素诱导D-半乳糖胺致敏大鼠急性肝衰竭的研究[D]. 罗杰.南昌大学 2007
本文编号：3570638
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