基于代谢组学的慢加急性肝衰竭疾病预后标志物的发现和确证

发布时间：2022-08-09 16:50

　　目的:慢加急性肝衰竭（Acute-on-chronic liver failure,ACLF）是我国常见的肝脏疾病,严重危害人类的身体健康,因此ACLF的防治备受人们关注。本学位论文首先基于核磁共振（~1HNMR）的代谢组学技术寻找ACLF患者预后血清差异代谢物。在此基础上,利用超高效液相色谱-质谱联用（Ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS/MS）技术对代谢差异物进一步定量分析,筛选ACLF患者预后生物标志物。方法:1.采用~1HNMR的非靶标代谢组学技术对127例28天死亡（n=42）与存活（n=85）的ACLF患者的血清进行检测,利用多元统计模型分析,筛选出能区分ACLF患者死亡与存活组间的特征的差异代谢物。2.建立和确定生物样品中胆碱、嘌呤类含量的UPLC-MS/MS定量分析检测方法。用乙腈对血液样品进行蛋白沉淀,以ZIC-HILIC亲水色谱柱,10mmol/ml乙酸铵-0.01%甲酸溶液为流动相采用梯度洗脱,对ACLF死亡与存活患者组的血清差异性代谢进行目标代谢检测。3.建立... 

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
    1.1 慢加急性肝衰竭简介
    1.2 代谢组学研究概况
    1.3 本论文研究思路
第2章 ACLF不同预后患者血清1HNMR代谢组学研究
    2.1 试剂与仪器
        2.1.1 试剂
        2.1.2 仪器
    2.2 实验部分
        2.2.1 实验研究对象及样本收集
        2.2.2 实验用溶液的配制
        2.2.3 ACLF血清处理方法
        2.2.4 NMR数据采集
        2.2.5 ~1H NMR数据预处理
        2.2.6 ~1H NMR统计学分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 ACLF患者血清~1H NMR图谱及PCA分析
        2.3.2 两种归一化方法的PLS-DA模型分析
        2.3.3 total归一化法的ACLF血清差异代谢物及代谢通路图分析
        2.3.4 肌酐校准归一化法的ACLF血清差异代谢物分析
        2.3.5 肌酐校准归一化法的ACLF患者血清差异代谢物预后ROC分析
        2.3.6 Logistic诊断模型筛选诊断效能最佳的生物标志物
    2.4 讨论
第3章 血清胆碱、嘌呤和胆汁酸定量检测及其与ACLF患者生存期ROC分析
    3.1 材料和仪器
        3.1.1 材料
        3.1.2 仪器
    3.2 实验部分
        第一节 血清中胆碱类代谢物定量分析
            1.1 胆碱类实验储备液的配制
            1.2 胆碱类样本前处理
            1.3 胆碱类标准曲线配置
            1.4 胆碱类检测方法和检测条件
            1.5 胆碱类统计学分析
            1.6 结果与分析
                1.6.1 UPLC-MS/MS对胆碱差异代谢物定量分析
                1.6.2 UPLC-MS/MS对胆碱差异代谢物ROC分析
        第二节 嘌呤类代谢物定量分析
            2.1 嘌呤类实验储备液的配制
            2.2 嘌呤类样本前处理
            2.3 嘌呤类标准曲线配置
            2.4 嘌呤类检测方法和检测条件
            2.5 嘌呤类统计学分析
            2.6 结果与分析
                2.6.1 UPLC-MS/MS对嘌呤类差异代谢物定量分析
                2.6.2 UPLC-MS/MS对嘌呤类差异代谢物ROC分析
        第三节 血胆汁酸类代谢物定量分析
            3.1 胆汁酸类实验储备液的配制
            3.2 胆汁酸类样本前处理
            3.3 胆汁酸类标准曲线配置
            3.4 胆汁酸类检测方法和检测条件
            3.5 胆汁酸类统计学分析
            3.6 结果与分析
                3.6.1 ACLF患者血清不同预后结果胆汁酸含量
                3.6.2 ACLF患者血清胆汁酸类代谢物不同预后结果ROC分析
        第四节 整合胆碱、嘌呤和胆汁酸定量数据筛选ACLF患者预后生物标志物
            4.1 利用Logistic模型筛选ACLF患者预后血清生物标志物组
            4.2 逐步判别分析筛选ACLF患者预后血清生物标志物组
第4章 ACLF患者尿液中蝶呤类差异代谢物分析及其作为预后标志物的价值研究
    4.1 实验部分
        4.1.1 蝶呤类实验检测对象及样品收集
        4.1.2 蝶呤类实验储备液的配制
        4.1.3 蝶呤类尿液样本前处理
        4.1.4 蝶呤类标准曲线配置
        4.1.5 蝶呤类加样回收率方法
        4.1.6 蝶呤类检测方法和检测条件
        4.1.7 蝶呤类方法学验证
        4.1.8 人体尿液样品中蝶呤类物质含量测定
    4.2 结果与分析
        4.2.1 色谱条件的优化
        4.2.2 分析方法的确定
        4.2.3 人体尿液样品中蝶呤类物质含量测定
        4.2.4 Logistic诊断模型筛选诊断效能最佳的生物标志物
    4.3 讨论
第5章 总结与展望
    5.1 总结
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
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[3]生殖遗传技术预防线粒体遗传病的研究进展[J]. 纪冬梅,曹云霞.  国际生殖健康/计划生育杂志. 2020(02)
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[5]胱抑素和血钠及血氨在早期判断慢加急性肝衰竭并发肝肾综合征中的价值[J]. 刘娟.  临床医药实践. 2020(02)
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[9]乙型肝炎肝硬化并发肾损害的危险因素及胱抑素C在诊断中的价值[J]. 阎双缓.  河北医药. 2019(23)
[10]HPLC-MS/MS间接测定类风湿关节炎患者红细胞中多聚谷氨酸化甲氨蝶呤的浓度[J]. 杜思颖,吕佩瑜,温悦,林小青,欧阳华.  中国药学杂志. 2019(22)

硕士论文
[1]大鼠尿液中蝶呤类化合物及氨基酸分析新方法的研究[D]. 孙玄.南昌大学 2015
[2]不同药物对NH4Cl诱导的肝细胞模型能量代谢影响[D]. 吕元君.郑州大学 2015



本文编号：3672923