小鼠TBI后脑细胞间隙外泌体长非编码RNA的表达及lncRNA-miRNA-mRNA网络分析

发布时间：2022-08-10 18:43

　　目的:应用高通量全转录组测序技术分析小鼠创伤性脑损伤（Traumatic Brain Injury,TBI）后脑细胞间隙外泌体中长非编码RNA（lncRNA）表达的变化。运用生物信息学方法分析差异性表达lncRNA,并构建lncRNA-miRNA-mRNA网络,阐明脑细胞间隙外泌体携带的lncRNA是如何调控TBI发生发展的,为TBI临床诊断提供新的分子标记物及为TBI的治疗提供新策略。方法:（1）建立外泌体分离方法:采用木瓜蛋白酶消化法结合外泌体分离试剂盒分离小鼠脑细胞间隙外泌体,用磷钨酸负染法利用透射电镜观察外泌体外观,Western Blot鉴定外泌体标志性蛋白CD63、TSG101和HSP70。（2）分组:24只C57BL/6小鼠随机分为TBI组和Sham组。（3）RNA高通量测序:提取总RNA,质控;去除核糖体RNA（rRNA）,构建RNA文库并进行文库质控;全转录组测序,对lncRNA、miRNA和mRNA进行检测、鉴定及注释;对差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA进行筛选。（4）验证RNA高通量测序结果:随机选择5个差异表达的lncRNA、miRNA和mRNA,并... 

【文章页数】：159 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
一、脑细胞间隙外泌体的分离与鉴定
    1.1 对象和方法
        1.1.1 实验动物
        1.1.2 主要仪器
        1.1.3 主要试剂
        1.1.4 实验方法
    1.2 结果
        1.2.1 透射电镜下外泌体的形态学鉴定
        1.2.2 Western Blot鉴定外泌体的表面标志物
    1.3 讨论
        1.3.1 外泌体的分离
        1.3.2 外泌体的鉴定
        1.3.3 TBI与外泌体
    1.4 小结
二、小鼠TBI后脑细胞间隙外泌体中lncRNA表达的变化
    2.1 对象和方法
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 实验方法
        2.1.5 统计分析
    2.2 结果
        2.2.1 RNA质控
        2.2.2 RNA文库质控
        2.2.3 RNA测序结果以及差异表达RNA的鉴定
        2.2.4 方法学验证:实时定量PCR验证RNA结果
    2.3 讨论
        2.3.1 小鼠TBI模型的建立
        2.3.2 lncRNA测序
    2.4 小结
三、小鼠TBI后外泌体中差异表达的lncRNA的生物信息学分析
    3.1 对象和方法
        3.1.1 实验方法
    3.2 结果
        3.2.1 差异表达lnc RNA的 GO富集结果
        3.2.2 差异表达lnc RNA的 KEGG信号通路分析结果
        3.2.3 lncRNA-miRNA-mRNA相互作用预测
    3.3 讨论
        3.3.1 GO分析
        3.3.2 KEGG通路分析
        3.3.3 lncRNA-miRNA-mRNA的相互作用
    3.4 小结
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
附录
综述 长非编码RNA在中枢神经系统疾病的作用
    综述参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]Arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy: From genetics to diagnostic and therapeutic challenges[J]. Bruno Pinamonti,Francesca Brun,Luisa Mestroni,Gianfranco Sinagra.  World Journal of Cardiology. 2014(12)



本文编号：3674158