改良处理自体血通过HIF-1α途径促进糖尿病小鼠伤口愈合的实验研究

发布时间：2022-10-19 19:02

　　目的:本研究通过糖尿病小鼠模型观察改良保存液处理的自体血对糖尿病小鼠伤口愈合情况的影响,观察HIF-1α信号通路在促进伤口愈合中的作用并探讨其可能的作用机制。方法:选择健康雄性昆明小鼠30只,8w龄,体重26~30g,适应性饲养1w后,小剂量注射STZ（50 mg/kg）连续注射5d构建糖尿病小鼠模型。成功建模后,采用随机数字表法分为3组:献血组（每只小鼠心脏0.6mL,分别置于改良保存液和标准保存液体外保存7d）;实验组:改良组（n=6）（回输改良保存液处理的自体血）;标准组（n=6）（回输标准保存液处理的自体血）。（1）小鼠麻醉后,进行背部皮肤消毒,用穿孔机在脊柱两侧制作直径为2 cm的开放性皮肤伤口。伤口模型建立后第1d、2d、3d将贮存在不同保存液中的自体血进行回输,并于伤后0d、1d、4d、7d和14d记录受伤部位,并计算伤口愈合面积百分比。（2）收集创面和边缘的全层皮肤,立即贮存于液氮中保存待测。RT-qPCR检测伤口组织中HIF-1α、VEGF、EGF、HSP90 mRNA表达水平;免疫组化检测皮肤组织HIF-1α、VEGF、EGF表达水平。（3）HIF-1α通过siRN... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
前言
材料、内容与方法
    1.研究材料
        1.1 药品和试剂
        1.2 所需设备及仪器
        1.3 研究内容
    2.研究方法
        2.1 实验动物选择
        2.2 小鼠模型制备
            2.2.1 糖尿病小鼠模型制备
            2.2.2 糖尿病小鼠自体血的采集及保存
            2.2.3 糖尿病小鼠创伤模型建立及自体血回输
            2.2.4 糖尿病小鼠创伤模型建立及自体血回输
        2.3 免疫组织化学
        2.4 皮肤成纤维细胞的分离、培养及鉴定及处理
            2.4.1 皮肤成纤维细胞的分离、培养及鉴定
            2.4.2 RNA干扰
            2.4.3 细胞转染
            2.4.4 灌注生物反应器中的细胞培养
            2.4.5 CCK8法
            2.4.6 流式细胞术检测
        2.5 Western blot法
        2.6 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)
    3 统计方法
    技术路线图
结果
    1.各组小鼠伤口愈合率的比较
    2.改良自体血对伤口相关指标的影响
    3.HIF-1α 通过 siRNA 在成纤维细胞中沉默后，改良自体血对相关指标的影响
    4.改良处理自体血对成纤维细胞的影响
讨论
    1.糖尿病伤口延迟愈合及其可能存在的机制
    2.糖尿病患者自体血液如何保存问题有待解决
    3.改良处理自体血对糖尿病小鼠伤口愈合率的影响
    4.改良处理自体血对HIF-1α通路的影响
    5.改良处理自体血对成纤维细胞的增殖和迁移能力的影响
结论
参考文献
综述 HIF-1α与糖尿病患者伤口愈合相关性的研究进展
    参考文献
附录
作者简介及读研期间主要科研成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]HIF-1α与自噬在糖尿病视网膜病变中的相关性研究现状[J]. 张梅,李春霞.  临床眼科杂志. 2017(05)
[2]缺氧诱导因子-1α与糖尿病血管新生的研究进展[J]. 艾丽根,刘芳.  中国糖尿病杂志. 2015(05)



本文编号：3693934