早期应用艾司洛尔对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡与氧化应激影响的实验研究

发布时间：2023-03-12 05:12

　　目的在大鼠脓毒症早期应用短效、高选择性β1受体阻滞剂艾司洛尔,观察其对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白表达、氧化应激反应、线粒体结构及心功能的影响,并初步探讨其心脏保护机制。方法63只Wistar雄性大鼠,随机分为三大组:假手术组(Sham组)、脓毒症组(CLP组)和艾司洛尔组(ES组)。根据采取标本时间的不同,每大组再随机分为6、12、24小时三个亚组。Sham组仅开腹盲肠探查,CLP和ES组均采用盲肠穿孔结扎法(CLP)法建立脓毒症大鼠模型。Sham和CLP组均以1ml/h速度持续微量泵入0.9%氯化钠溶液,共6 h;ES组同样以1ml/h速度持续微量泵入艾司洛尔稀释溶液[15 mg/(kg·h)],共计6 h。大鼠分别于造模成功并泵药开始后6 h、12 h及24 h时间点处死,无菌条件下迅速开胸取血并摘取心脏,处理血液、心脏组织标本。采用ELISA法检测血清TNF-α、BNP水平;WST-1法检测心肌组织SOD活力;分光光度法测定心肌组织MDA含量;Western Blot检测心肌组织Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。透射电镜下观察心肌线粒体形态结构变化情况。结果1....

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 脓毒症研究背景与现状
    1.2 细胞凋亡机制
    1.3 氧化应激与凋亡
    1.4 线粒体的核心地位
    1.5 艾司洛尔对脓毒症心脏的保护作用
    1.6 本研究的目的与意义
    参考文献
第二章 研究内容与过程
    2.1 研究内容与技术路线图
        2.1.1 研究内容
        2.1.2 技术路线图
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验动物
        2.2.2 主要实验试剂
        2.2.3 试剂配制
        2.2.4 实验器材与设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 动物分组
        2.3.2 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)法建立大鼠脓毒症模型
        2.3.3 脓毒症模型评估
        2.3.4 显微镜下股静脉置管及用药
        2.3.5 血清标本的采集与处理
        2.3.6 心肌组织标本的采集与处理
    2.4 酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清TNF-α、BNP水平
        2.4.1 Elisa测定原理
        2.4.2 实验前准备
        2.4.3 主要检测步骤
    2.5 WST-1 法、分光光度法分别检测心肌组织SOD、MDA
        2.5.1 WST-1法测定原理
        2.5.2 实验前准备(WST-1法)
        2.5.3 SOD主要检测步骤
        2.5.4 分光光度法检测MDA实验前准备
        2.5.5 MDA主要检测步骤
    2.6 Western Blot法检测心肌组织Caspase-3、Bcl-2、Bax表达水平
        2.6.1 提取心肌组织蛋白
        2.6.2 BCA法检测蛋白含量及蛋白变性
        2.6.3 SDS-PAGE凝胶制备与灌胶
        2.6.4 上样与电泳
        2.6.5 湿转膜法转膜
        2.6.6 封闭
        2.6.7 孵育一抗、二抗
        2.6.8 ECL法显影曝光
        2.6.9 图像灰度值测定与分析
    2.7 透射电镜检测心肌细胞及线粒体形态
        2.7.1 电镜标本制备
        2.7.2 电镜观察并拍照
    2.8 统计学分析
第三章 研究结果
    3.1 血清TNF-α水平变化
    3.2 血清BNP水平变化
    3.3 心肌组织SOD活力变化
    3.4 心肌组织MDA含量水平变化
    3.5 心肌组织Caspase-3、Bax、Bcl-2 表达水平变化
    3.6 透射电镜结果
第四章 讨论
    4.1 大鼠盲肠结扎与穿刺(CLP)脓毒症模型
    4.2 TNF-α与脓毒症心肌细胞凋亡、氧化应激
    4.3 脓毒症与氧化应激
    4.4 脓毒症与心肌凋亡相关蛋白表达及线粒体损伤
    4.5 脓毒症诱导的心功能障碍与BNP
第五章 结论
    5.1 主要结论
    5.2 不足与展望
参考文献
综述
    参考文献
在学期间的研究成果
致谢
中英文对照词表



本文编号：3761014