miR-28-5p靶向Nrf2调控LPS诱导的急性肺损伤机制研究

发布时间：2023-04-16 23:03

　　目的探究miR-28-5p在脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)进程中的作用和分子机制。方法将40只C57BL/6雄鼠按随机数字表法分为生理盐水组、ALI-3h组、ALI-6h组和ALI-12h组,每组10只。利用LPS诱导小鼠ALI 3h、6h、12h,取肺组织进行荧光定量PCR(RT-PCR)检测miR-28-5p表达;同时体外利用LPS刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7发生炎症反应,RT-PCR检测细胞miR-28-5p表达;巨噬细胞过表达miR-28-5p mimic后利用LPS刺激,RT-PCR检测巨噬细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)表达情况;RT-PCR和Western blot检测抗氧化关键分子核因子E2相关因子2 (Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)表达水平;Targetscan 7.0预测miR-28-5p靶向基因,突变结合位点后,并通过荧光素酶报告基因系统检测miR-28-5p对靶基因的转录调控作用。结果与生理盐水组比较,LPS诱导小鼠ALI 3h、6h、12h TNF-α、IL-1β水平明显升...

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【文章目录】：
1 实验材料
    1.1 动物
    1.2 细胞株
    1.3 试剂
    1.4 仪器
2 实验方法
    2.1 小鼠ALI模型构建
    2.2 支气管肺泡灌洗液中细胞因子含量测定
    2.3 小鼠肺巨噬细胞株RAW264.7培养与处理
    2.4 设计mi R-28-5p mimic，转染巨噬细胞
    2.5 RT-PCR检测mi R-28-5p、TNF-α、IL-1β、Nrf2、HO-1、NQO1表达水平
    2.6 Western bolt检测Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平
    2.7统计学方法
3 实验结果
    3.1 mi R-28-5p在LPS诱导的小鼠ALI模型肺组织表达
    3.2 LPS刺激巨噬细胞后mi R-28-5p表达
    3.3 mi R-28-5p mimic促进巨噬细胞M1型极化
    3.4 mi R-28-5p促进Nrf2及其信号表达
    3.5 mi R-28-5p靶向Nrf2基因3'UTR序列
4 讨论



本文编号：3792062