脂多糖诱导肺泡上皮细胞外泌体通过miR-92a-3p调控肺泡巨噬细胞炎症反应

发布时间：2024-02-14 22:31

　　目的:初步探讨脂多糖诱导肺泡上皮细胞源性外泌体调控肺泡巨噬细胞炎症反应的分子机制。方法:通过miRNAs基因芯片技术比较正常肺泡上皮细胞来源的外泌体(AEC-Exo)和LPS诱导肺泡上皮细胞来源的外泌体(LPS-AEC-Exo)组间差异miRNAs表达谱并进行验证,筛选得到与炎症反应密切相关的miR-92a-3p;利用qRT-PCR技术分别检测LPS刺激下AEC中miR-92a-3p的表达情况以及LPS-AEC-Exo处理后AM中miR-92a-3p的表达情况;将miR-92a-3p mimic或inhibitor转染至AEC中,过表达AEC-Exo中的miR-92a-3p或沉默LPS-AEC-Exo中miR-92a-3p的表达后与AM共培养,检测各组AM中TNF-α、IL-1β、IL-6的表达变化以及NF-κB信号通路激活情况;生物信息学预测miR-92a-3p的下游靶基因,检测调控AEC-Exo和LPS-AEC-Exo中miR-92a-3p表达后,各组AM中下游靶基因PTEN的表达变化;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-92a-3p与靶基因3’UTR区的靶向结合。结果:(1)m...

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验细胞
        2.1.2 主要实验试剂和耗材
        2.1.3 主要仪器和设备
    2.2 实验试剂的配置
        2.2.1 培养基的配制
        2.2.2 LPS的配制
        2.2.3 Western Blot相关试剂的配制
    2.3 实验方法
        2.3.1 AM、AEC培养
        2.3.2 实验分组及实验流程图
        2.3.3 外泌体提取
        2.3.4 RNA的提取、纯度及完整性检测
        2.3.5 miRNAs芯片分析
        2.3.6 逆转录反应
        2.3.7 qRT-PCR
        2.3.8 细胞转染
        2.3.9 Western Blot
        2.3.10 Firefly luciferase& Renilla luciferase双萤光素报告基因检测
    2.4 统计学分析
第3章 结果
    3.1 脂多糖诱导的肺泡上皮细胞外泌体源性miRNAs的表达变化
        3.1.1 MiRNAs基因芯片检测LPS-AEC-Exo中 miRNAs表达谱
    3.2 miR-92a-3p在 LPS-AEC-Exo发挥致炎效应中的作用
        3.2.1 LPS-AEC-Exo将 miR-92a-3p递送到肺泡巨噬细胞
        3.2.2 LPS-AEC-Exo通过miR-92a-3p刺激肺泡巨噬细胞活化
        3.2.3 LPS-AEC-Exo中 miR-92a-3p靶向作用于AM中 PTEN的3’UTR区域
第4章 讨论
第5章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 进一步工作方向
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：3898726