Hippocalcin在重症中暑下丘脑神经元损伤中的抗凋亡作用

发布时间：2024-03-07 18:40

　　目的:中暑是一种严重的热性疾病,主要表现为体温过高与中枢神经系统功能障碍,严重的中暑可导致多脏器功能衰竭,具有较高的死亡率与致残率。当前研究认为,下丘脑主动参与体温调节功能障碍,在重症中暑发生过程中具有关键作用,但目前具体病理生理机制尚未明确。本研究中通过建立重症中暑小鼠模型,利用组织病理学、二维荧光差异凝胶电泳分析、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱明确下丘脑的损伤并分析鉴定下丘脑差异表达的蛋白质,进一步通过嗜铬细胞瘤-12(PC12)神经元细胞系建立热打击神经元细胞模型研究海马钙结合蛋白对细胞凋亡的作用,以揭示重症中暑神经元细胞的病理过程。最后,通过在体、体外研究乌司他丁在热打击动物与细胞中的作用及具体可能作用机制,并进一步验证HPAC的作用,为重症中暑的临床治疗以及研究提供基础与新思路。方法:在体实验中利用仿真气候舱建立中暑小鼠模型,利用组织病理学检测不同中暑程度小鼠下丘脑损伤情况;通过荧光二维差异凝胶电泳分析下丘脑中14种差异表达的蛋白质,并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定,并选择海马钙结合蛋白(HPAC)作为我们的研究对象,应用TUNEL、Western blot、免疫...

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献研究
    第一节 流行病学
    第二节 下丘脑损伤在重症中暑发病中的作用
    第三节 重症中暑脑损伤的病理生理机制
    第四节 HPAC在下丘脑损伤中的研究现状
    第五节 乌司他丁在中暑中的治疗
第二章 材料与方法
    第一节 实验材料
        一、动物与细胞
        二、主要仪器
        三、主要试剂
        四、主要试剂配制
    第二节 实验方法
        一、重症中暑小鼠模型制备与冷却处理方法
        二、给药方案
        三、组织病理学分析
        四、双向荧光差异凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析
        五、细胞培养和热打击方案
        六、MTT法细胞活力检测
        七、总蛋白提取及BCA法蛋白定量
        八、Caspase-3活性测定
        九、流式细胞术分析
        十、细胞转染
        十一、免疫组化
        十二、TUNEL原位检测凋亡细胞
        十三、统计学方法
第三章 结果
    第一节 热打击致下丘脑损伤的在体研究
        一、热打击致下丘脑组织神经元损伤
        二、热打击小鼠下丘脑中差异表达蛋白质的鉴定结果
        三、热打击小鼠下丘脑中HPAC的表达显著下调
    第二节 HPAC在热打击下丘脑神经元细胞凋亡中的作用研究
        一、热打击PC12细胞HPAC表达下降
        二、热打击至PC12细胞凋亡
        三、HPAC过表达可降低热打击诱导的PC12细胞凋亡
        四、HPAC表达下调增加热打击诱导的PC12细胞凋亡
    第三节 乌司他丁在中暑下丘脑损伤的保护作用
        一、乌司他丁可抑制热打击PC12细胞HPAC表达的下调
        二、乌司他丁可减轻热打击PC12细胞凋亡
        三、乌司他丁抑制中暑小鼠下丘脑HPAC表达的下降
        四、乌司他丁预处理可降低中暑小鼠下丘脑神经元细胞凋亡水平
        五、乌司他丁可降低中暑小鼠下丘脑病理损伤评分
        六、乌司他丁可延长中暑小鼠中心体温变化平台期增加小鼠耐热性
第四章 讨论
结语
    参考文献
附录
在校期间发表论文情况
致谢
附件



本文编号：3921570